& E159 EasyPAGE Kit

& E159 EasyPAGE Kit

*以1.0 mm厚度的10 cm x 8.5 cm 的 mini胶为标准

EasyPAGE快速SDS-PAGE蛋白质电泳胶制备试剂盒是GenStar公司研制的创新性产品。该试剂采用合理设计的预混合配方和配制流程，能迅速配制得到高质量的SDS-聚丙烯酰胺凝胶，具有快速、方便、安全、稳定等特点。本试剂盒提供四种常用浓度8%、10%、12%和15%（Cat. No. E158-08，10，12，15）以及简装大包装（Cat. No. E159-08，10，12，15），方便研究人员选择。

用途

• 快速制备SDS-PAGE蛋白质变性电泳凝胶

特点

• 简单快速：试剂盒提供配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶的全部试剂，30~40分钟即可完成凝胶配制
• 安全方便：减少和有毒物质的接触，方便运输和存放
• 兼容性好：可以与任何制胶系统和电泳槽配合使用
• 批次稳定：采用精心挑选的高品质原料，遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测，最大程度上缩小了批间差异

产品组分及保存条件

成分	货号	总量	价格	用途	保存条件
溶液A	E158-101	50 ml	54	8%、10%、12%或15%分离胶成分	4℃避光、密闭，六个月有效
溶液B	E158-102	10 ml	12	5%浓缩胶成分	4℃避光、密闭，六个月有效
溶液C	E158-103	1 ml	22	促凝剂	-20℃保存6个月，4℃保存2周
溶液D	E158-104	1 ml	22	促凝剂	4℃避光保存6个月
溶液E	E158-105	0.5 ml	12	5 x 蛋白上样缓冲液，含β-ME	-20℃保存一年，4℃保存1个月

说明：

• EASY-PAGE Kit中各个组分是按照标准制胶比例配比而成的。由于研究人员操作习惯不同，可能会出现个别组分过剩或量不足的情况。GenStar公司特意为您准备了EASY-PAGE Kit中各个单组分产品，供您随意选择。
• 为了确保获得最佳电泳分离效果，建议您提前2~3天向GenStar公司订购本产品，以便我们能够及时地把最新批次的产品送到您的手上。收到产品后请尽快使用，尽量在2~3个月内用完。

使用方法（以1.0 mm x 10 cm x 8.5 cm 的胶为例）

 

Laemmli Gel传统配制方法与EasyPAGE Kit的比较

 

EasyPAGE Kit使用经验指南

1．对于大小规格不同的凝胶制备，应根据其规格按比例调整试剂用量（如下层分离胶体积为10 ml，则A液取10 ml，C液取100μl，D液取100 μl）。
2．上层浓缩胶长度要适中，梳子孔底部距离下层胶至少0.5 cm，请根据每种大小规格凝胶的实际需要调整用量，在灌注下层分离胶时给上层浓缩胶留出足够的空间，否则上层胶过短将影响凝聚效果。
3．制胶过程应避免产生气泡，空气中的氧气会阻碍凝聚。
4．C液于4℃下易失效。如一个月内用不完，请于-20℃保存。如制胶时发现凝胶时间偏长（下层胶超过40分钟），很有可能是因C液保存不当而失效引起。可使用10%的过硫酸铵代替，或购买我公司的配套C液产品（Cat. No. E158-103）。
5．凝胶速度受促凝成分含量和室内温度、湿度等诸多因素影响。如需急用，可酌情加大C液和D液的用量，但C液和D液过多会降低蛋白质条带的分辨率，同时因凝胶过快而导致凝胶不均匀，影响分离效果。高温有利于凝聚，所以转移到温箱中可加快凝胶速度。推荐将凝胶时间控制在15分钟以上。经验表明，30~40分钟凝聚而成的凝胶分离效果最好。
6．胶制成后若不立即电泳，可置于密闭塑料袋或容器中，加入少量1x电泳缓冲液，于4℃保存两周左右。
7．丙烯酰胺溶液长期保存会发生不可避免的降解反应，即丙烯酰胺水解成为丙烯酸，N-N· -甲叉双丙烯酰胺水解成双丙烯酸。该反应受光和高pH环境促进，SDS也间接促进了这一降解过程。经我们跟踪研究，EasyPAGE产品中A液pH值下降速度为0.05/月，pH值下降可能是由于丙烯酸成分增加引起的。虽然存在这种损耗，EasyPAGE实际电泳效果在两个月内不存在可察觉差异，对后续转膜等实验亦无影响。存放期超过三个月后，凝胶的分离结果表现出可察觉的凝胶浓度下降，经实际测试，浓度大约降低1%~2%，即原标注12%浓度的EasyPAGE电泳效果表现接近10%~11%；而保存六个月后的12% EasyPAGEkit浓度表现基本与8%浓度相当。所以，建议用户购买本产品后尽快使用，如超过三个月，对电泳结果的分析需考虑降解造成的影响。
8．蛋白样品本身的盐浓度会影响条带形状，如条带变宽、变窄等。故电泳前应确保蛋白样品已经有效处理。
9．电泳缓冲液的配制对取得良好电泳效果至关重要。应选择可靠的化学试剂，有条件时使用去离子水配制。推荐使用我公司标准化生产的10x Tris-Glycine gel电泳缓冲液（Cat. No. E152-01）。

应用实例

使用EASY-PAGE Kit制备的12% Tris-Glycine gel分离不同E. coli BL21（DE）表达菌株裂解液的电泳效果图