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- HZbscience
- 中国/美国
- 11742HZ03
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冰袋运输。-20℃保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
TCF/LEF1 GFP Reporter Plasmid
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
μg/盒
TCF/LEF1-GFP报告基因是沪震生物自主研发的用于检测Wnt信号转导通路的报告基因。Wnt信号通路引起去磷酸化、稳定化以及β-catenin的核转移。结合TCF/LEF1转录因子的稳定β-catenin复合物将引起Wnt应答基因的激活。
TCF/LEF1-GFP报告基因主要用于检测细胞中Wnt信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMTCF/LEF1-GFP是沪震生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个TCF/LEF1结合位点，可以高效地检测TCF/LEF1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得TCF/LEF1-GFP报告基因更易于转染。
质粒图谱
pGM TCF/LEF1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’
TCF/LEF1-GFP报告基因质粒运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
使用说明
pGMTCF/LEF1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。
TCF/LEF1-GFP报告基因质粒注意事项
1）本质粒未经沪震生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
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文献和实验表达后修饰，直接具有完全酶活。发光机制生物荧光实质是一种化学荧光。萤火虫荧光素酶在Mg2+、ATP、O2的参与下，催化D2荧光素(D2luciferin) 氧化脱羧，产生激活态的氧化荧光素，并放出光子，产生550～580 nm 的荧光，其化学反应式如下。这种无需激发光就可发出偏红色的生物荧光，其组织穿透能力明显强于绿色荧光蛋白(GFP)。荧光素酶是靠酶和底物的相互反应发光，特异性很强，灵敏度高，由于没有激发光的非特异性干扰，信噪比也比较高。二、荧光素酶报告基因的检测流程1、重组质粒制备: 制备含有
。 杂蛋白与6′His标签蛋白的非特异性结合也可能是通过疏水作用产生。在洗脱液中加入以下物质可以减少因此而产生的非特异性：非离子洗涤剂（Trion X-100或Tween 20）;30%的乙醇或甘油。注意，不同的蛋白纯化所需加入的最佳浓度不同，需要试验摸索。 杂蛋白也可能是截断的标签蛋白。这样的杂蛋白可以用Western Blot技术很容易的识别。通过质粒测序，检查出内部的翻译起始位点或成熟前的终止子。 5、Ni-NTA 是否能用于纯化含有内部His标签的蛋白？ 是的。Ni-NTA可以与His标签
与6′His标签蛋白间形成的二硫键。这在目标蛋白中包含相对多的半胱氨酸时尤其重要。 杂蛋白与6′His标签蛋白的非特异性结合也可能是通过疏水作用产生。在洗脱液中加入以下物质可以减少因此而产生的非特异性：非离子洗涤剂（Trion X-100或Tween 20）;30%的乙醇或甘油。注意，不同的蛋白纯化所需加入的最佳浓度不同，需要试验摸索。 杂蛋白也可能是截断的标签蛋白。这样的杂蛋白可以用Western Blot技术很容易的识别。通过质粒测序，检查出内部的翻译起始位点或成熟前的终止
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