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- HZbscience
- 中国/美国
- 11532HZ03
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冰袋运输。-20℃保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
C/EBPa luciferase reporter plasmid
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
μg/盒
C/EBPa荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（C/EBPa luciferase reporter plasimd）是沪震生物自主研发的用于检测C/EBPa转录活性水平为目的的报告基因。C/EBP(CCAAT enhancer binding proteins)是一组耐热的转录因子，主要对调控有丝分裂生长停滞和分化。
C/EBPa报告基因主要检测细胞中C/EBPa调节信号通路的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMC/EBPa-Lu是沪震生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个C/EBPa结合位点，可以高灵敏度地检测C/EBPa的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得C/EBPa报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱
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C/EBPa--Luc荧光素酶报告基因质粒运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
注意事项
本质粒未经沪震生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用说明
pGMC/EBPa-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
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文献和实验每孔比例为pLenti：Firefly：Renilla：转染试剂=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL b) 稀释好DNA及转染试剂，常温孵育5min c) 将稀释好的DNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min d) 每孔弃去15μL培养基，将15μL DNA转染混合液添加到每孔细胞样品中 e) 转染6h后，换新鲜完全培养基 2. 双报告基因检测 a) 质粒共转染48h后，弃去培养基，用100μL 1XPBS洗1遍
待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒；2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等；3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，设置不同的检测时间点，一般为24h/48h；4、外界干预: 转染后，可进行物理/化学/病毒等的相应刺激；5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测。三、荧光素酶报告基因的优点
腔肠荧光素在水溶液中的固有特点。通常用来制备细胞裂解液的试剂可增强海洋腔肠荧光素自发光，包括Triton X-100，Promega的细胞培养裂解试（CCLR）和报告基因裂解试剂（RLB），这些试剂还会显着抑制海洋腔肠荧光素酶的发光反应。PLB经特别设计用来最大地增强荧光素酶活力，使自发光减弱到最低，可提供最优的测试灵敏度，定量很低水平的海洋腔肠荧光素酶。另外，PLB抑制发泡，非常适合高通量应用，可用于自动化系统中将培养在多孔板中的细胞组制备成裂解液并测试。图5 双荧光素酶报告基因测试系统湮灭萤火虫荧光素酶
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