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- HZbscience
- 中国/美国
- 11402HZ60
- 2025年07月16日
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冰袋运输。-20℃保存
- 保质期：
1年
- 英文名：
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
μg/盒
萤火虫荧光素酶（firefly luciferase）大小为61 KDa，单亚基蛋白，能够催化荧光素（luciferin）氧化，生成氧化荧光素oxyluciferin；海参荧光素酶（renilla luciferase）为36 KDa的单亚基蛋白，能够催化腔肠素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻译后均无需修饰即可发挥作用。
萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560 nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465 nm。
通常将目的基因的5’UTR或者启动子克隆至Firefly Luciferase的上游，或者3’UTR克隆至Firefly Luciferase的下游，通过检测萤火虫荧光素酶的量来检测启动子或者调控原件的转录调控作用。Renilla Luciferase作为内参，来消除细胞数量或者转染效率的差异。
冰袋运输。
本产品-20℃保存12个月。长期保存推荐-80℃。
萤火虫荧光素酶反应工作液和海肾荧光素酶反应工作液现配现用。
实验步骤
1：裂解细胞
1）将细胞裂解液充分混匀，按如下方式加入细胞裂解液，充分裂解细胞。
a: 对于贴壁细胞，吸尽细胞培养液，按照下表比例加入细胞裂解液，轻轻旋转培养皿或者培养板使裂解液完全覆盖细胞，
b: 对于悬浮细胞，离心弃去上清，按照下表比例加入裂解液，
2）（选作）10000-16000转离心1 min，取上清。
2：荧光检测
1）取20 μL细胞裂解液，加至黑色酶标板中。按照实验需要，可设置3孔-5孔重复。
2）配置萤火虫荧光素酶反应工作液和海肾荧光素酶反应液，即萤火虫荧光素酶底物（50 X）和海肾荧光素酶底物（50 X）分别用对应的缓冲液稀释至1 X 工作液。并孵育至室温。
3）加入100 μL 萤火虫荧光素酶反应液，震板混匀，检测萤火虫荧光素酶的活力，检测尽量在30 min内完成。
4）加入100 μL 海肾荧光素酶反应液，震板混匀，检测海肾荧光素酶的活力，检测尽量在30 min内完成。
5）分析数据。
双荧光素酶报告基因检测试剂盒操作流程如下：
双荧光素酶报告基因检测试剂盒注意事项
1）检测过程中需自备耗材和设备包括如下：PBS；100 μL移液器或者排枪；黑色酶标板；Luminometer发光计或者多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器。
2）关于检测仪器的选择：能够检测化学发光或者生物发光的仪器都可适用于此试剂盒。如果使用多功能酶标仪，为防止各孔之间的干扰，我们推荐使用黑色酶标板，并且不同实验组之间最好有间隔。
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文献和实验在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统，结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速，灵敏，简便。系统还提供PLB裂解液，用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞，不需操作单个样品
【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题？
lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒，但是我不知道两种质粒间的比例是多少，有哪位前辈做过这方面实验的，请帮我指点一下，谢谢了 xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL－TK（海蜃素荧光素酶）的荧光值要高一些，我转20ng/孔（24孔板），作为内参.pGL3（萤火虫荧光素酶）的荧光值低一些，我转0.4ug/孔（24孔板）然后0.4ug的调整质粒。这样的话，萤火虫荧光素酶
1、双荧光素酶实验原理； 2、验证转录因子与启动子互作； 3、验证miRNA与mRNA互作
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