KOF DNA聚合酶 核酸扩增(PCR)

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名称：KOF DNA聚合酶 核酸扩增(PCR)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：JN0017
英文名：KOF DNA Polymerase
  本酶是一种经过基因工程改造的高保真DNA聚合酶，具有极强的3"→5"核酸外切酶活性（Proof-reading活性），当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。与普通pfu相比，保真性更高，约为普通taq的50倍，普通pfu的6倍。其扩增性能也比普通Pfu高，成功克服了普通pfu酶扩增效率低的缺陷。

产品组成：

 

组份	JN0017-250U
KOF DNA 聚合酶（1U/ul）	250ul
dNTP混合液	250ul
10X KOF Buffer with Mg2+	2ml

产品用途：用于要求保真度高的PCR反应，包括克隆PCR，DNA片段拼接，引入突变，全基因合成，DNA片段的补平等。

使用建议：
KOF DNA Polymerase 产生的PCR产物为平滑末端，无3’端“A”突出，其PCR产物的克隆有几种方案。
1、PCR前引物进行5’ 加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
2、将产物3’ 末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
3、引物中引入15bp与载体同源序列，利用BalbRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat#JN0001）直接连接到目的载体。
由于KOF DNA聚合酶的校正活性可引起引物从3’ 端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30bp。另外为了减少由3’→5’外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入KOF酶。

应用实例：


图例一）50ul扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对0.6kb～12.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.6kb；泳道2：1.0kb；泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；泳道5：4.0kb； 泳道6：8.0kb；泳道7：10.0kb；泳道8：12.0kb；泳道M：1kb DNA Marker；

图例二）50ul扩增体系中，分别以50ng～0.05ng质粒为模板进行的灵敏度的扩增结果。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 ladder

常用反应体系（50μl）

10X KOF Buffer	5μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)	1.0μl
模板	1-50ng（质粒）
10ng-1μg(基因组)
KOF	1μl
ddH2O	至50μl

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K：

温度	时间	循环数
94℃	1分钟30秒
94℃	20秒	30次循环
57℃	20秒
72℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：

温度	时间	循环数
94℃	5秒	30次循环
68℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

质量保证：经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内，外切酶污染。

活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

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·重组人精液凝固蛋白1(精囊蛋白1)(精囊凝胶蛋白1)(Sg1)(SEMG1)
编号：JN0662
英文名称：Recombinant Human Semenogelin-1
规格：10μg|50μg|500μg|1mg
本品由我们的哺乳动物细胞表达系统制备而成，目的基因编码的Gln24-Thr402在C端含有His标签。

Semenogelin-1质量控制：＞95%(还原性SDS-PAGE)

Semenogelin-1制剂：冻干品

Semenogelin-1保存：
冻干蛋白置于-20℃以下可长期保存，室温条件下可稳定保存3周。
复溶蛋白溶液可在4～7℃保存2～7天，可分装后置于-20℃保存三个月。

Semenogelin-1复溶：
打开试剂管前请先离心。
复溶浓度推荐大于100 μg/ml。
冻干蛋白请溶于ddH2O。
复溶后，请根据用量分装冻存，避免反复冻融。

关于Semenogelin-1：
Semenogelin-1 (SEMG1) is the predominant protein in semen; it is a secretory protein involved in the formation of a gel matrix entrapping the accessory gland secretions and ejaculated spermatozoa. The prostate-specific antigen (PSA) protease processes SEMG1 into smaller peptides, each possibly having a separate function. In the proteolysis process, Alpha-inhibin-92 and alpha-inhibin-31 are produced; they inhibit the secretion of pituitary follicle-stimulating hormone. At the same time, it breaks down the gel matrix, allowing the spermatozoa to move more freely.


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