miRNA cDNA第一链合成试剂盒价格

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北京百奥莱博供应的miRNA cDNA第一链合成试剂盒价格用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多miRNA cDNA第一链合成试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：miRNA cDNA第一链合成试剂盒价格
编号：BTN130911
规格：25次
英文名：miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒采用在miRNA 3´末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应，最终合成miRNA 对应的第一链cDNA。其反应流程如下：


产品特点：
1. 两步式操作，先进行Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。
2. 只需要1μg的total RNA。
3. 所得cDNA可用于检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。
4.与miRNA荧光定量PCR 检测试剂盒兼容。
5.特异性好，独特的miRNA引物及反应体系避免了Pre-miRNA的非特异扩增。

试剂盒组成：

 

成分	规格
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	10μl
10×Poly(A)聚合酶反应液	50μl
ATP溶液，1mM	50μl
Oligo(dT)-Tag引物(0.5ug/μL)	25μl
MMLV 逆转录(含RI)	50μl
4×RT Buffer(含dNTP)	125μl
RNase-free 水	1ml

储存条件：低温运输，-20℃保存。

使用方法：

一、对miRNA 3´末端进行加Poly(A)处理
1.在冰上预冷RNase-Free的反应管内加入以下试剂至总体积20μL。注意需要最后加入E.coli Poly(A)聚合酶。

试剂组份	体积
自备的Total RNA(见注)	1μg
10× Poly(A)聚合酶反应液	2μl
ATP溶液，1mM	2μl
RNase-Free水	补水至20μL
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	0.4μL(2U)

注：在反应中使用的Total RNA必须含有miRNA。也可以直接使用miRNA(建议加入量为2–5μL，需根据目的miRNA的丰度决定)。
2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在37℃反应60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验(注意：只能把2μL 直接用于后续的RT反应，多于2μL 则需要先乙醇-乙酸*沉淀，再将加尾后的miRNA 溶于水，然后再取所需量用于RT。如果不经过沉淀，带入的残留的poly(A)聚合酶反应液将会干扰RT反应)，也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

二、对带Poly(A)尾巴的miRNA进行逆转录反应
3. 按照下表设置20μL体系的RT反应：

成分	体积
Poly(A)反应产物(来于上步)	2μl
RNase-Free水	10μl
Oligo(dT)-Tag引物	1μl
4×RT Buffer(含dNTP)	5μl
MMLV 逆转录酶(含RI)	2μl

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在42℃反应60 min。
5. 70℃保温10 min 终止反应。
6. 合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后续的荧光PCR 定量检测，不需要纯化。

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·Tris缓冲盐溶液(TBS)
编号：BTN131109
英文名称：Tris-Buffered Saline
规格：10包
本产品为免疫印迹绝佳的洗膜缓冲液。

产品特点：
1. 1×TBS含25mM Tris，0.15M的*化*，pH7.2-7.5。
2. 每个干粉混合包装的BupHPack可溶于水中形成500ml 1×TBS。
3. 20×规格提供含有或不含Tween*-20去垢剂的两种包装。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·多聚甲醛-*氧化*固定液
编号：BTN131283
英文名称：Polyoxymethylene NaOH Fixative Solution
规格：250mL
本产品为甲醛、磷酸二**、*氧化*混合液，pH为7.2-7.4。本固定液适用于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时最好加入少量新鲜配制的戊二醛。该固定液条件温和，组织固定于该液中，4℃保存数月，仍可获得满意的染色效果。0-4℃条件下固定时间为15分钟-2小时。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·粪便RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN101109
英文名称：Fecal RNA column Extraction Kit
规格：50次
由于粪便中有机质含量丰富，对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从粪便中提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本产品是在粪便RNA提取试剂盒基础上开发的柱式粪便RNA提取产品。

试剂盒特点：
1. 操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的柱式粪便RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
酸洗玻璃珠，400μm	25g
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

使用方法：
1.在自备的3-5mL离心管中称取0.5-1 g 粪便，加入0.5g 玻璃珠和1mL溶液A，盖紧离心盖后震荡器上剧烈震荡5-10分钟。注意：如果放置在低温，溶液A可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液(一般呈棕色)转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。所取上清液不要超过1mL，否则后续操作没有足够空间。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000rpm离心3～5分钟。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入等体积的溶液C，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。
7.室温12000rpm离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，套入收集管中后12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 加0.7mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 加0.3mL 通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
12. 将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free 收集管中，加入30-100μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
14. 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


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