Pfu DNA Polymerase 核酸扩增(PCR)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Pfu DNA Polymerase 核酸扩增(PCR)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Pfu DNA Polymerase 核酸扩增(PCR)
规格：500U
英文名：Pfu DNA Polymerase
品牌：百奥莱博
编号：WE0107
产地：国产|进口
  Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具有纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性，对于高GC含量模板，提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。

产品组成：

 

组份	500U
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的Pfu DNA Polymerase 核酸扩增(PCR)，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
ARB11891 人磷酯酶C(PLC)定量分析 Human phospholipase c,plc ELISA KIT
ARB11592 人梅毒非特异性抗体(TPPA)elisa测定使用说明书 
BL0230 Dextran T-70  葡聚糖 T-70
癸基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷 TRICINE 98854-16-1
ARB12229 大鼠血栓前体蛋白(TpP)定量分析 Rat thrombus precursor protein,tpp ELISA KIT
BTN131047 脱氧胆酸* Sodium Deoxycholate
HC0082 0.5mlPCR管
BTN130568 α-Tubulin小鼠单抗 α-Tubulin Mouse Mab
B0101 胎牛血清(辐照灭菌)
CYB166008-D 兔抗豚鼠IgG-GOLD
13721-39-6 原钒酸*(化学纯) Sodium orthovanadate 
蔗糖酯 γ-L-Glutamyl-β-naphthylamide
Pfu DNA Polymerase 核酸扩增(PCR)关键词：Pfu DNA Polymerase,WE0107


·溶菌酶
编号：WE0214
英文名称：Lysozyme
规格：100mg

·粪便基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0180
英文名称：Stool Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从粪便样本中提取总DNA，包括细胞、细菌、寄生虫以及病毒DNA，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。本品可处理多至300 mg的粪便样本，纯化获得主要为20-30 kb的DNA片段，纯化过程中不需*酚或*仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，可在一小时内获得高纯度的DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，同时粪便中的蛋白杂质及抑制下游反应的其他有机化合物可流过膜，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer SW	60ml
Buffer SL	60ml
Buffer GL	50ml
Buffer GW1(浓缩液)	2×13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
吸附柱DM及收集管	50套

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
4、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)， RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号:WE0225S。

操作步骤：
1、取100-300 mg粪便样本，置于离心管(自备)中。
2、加入1ml Buffer SW，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中。12000rpm(～13400×g)离心1分钟，弃上清。
3、加入1ml Buffer SL，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中，65℃水浴20分钟，期间可每隔5分钟涡旋振荡15秒。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、12000rpm离心3分钟，将上清移至新的离心管(自备)中。
5、向上清液中加等体积Buffer GL，颠倒混匀15-25次，冰上放置5分钟。12000rpm离心5分钟。
注意: 此时液体可能为透明或浑浊状态，均不影响实验。
6、将步骤5中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
11、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍通常即可解决。

储存条件：室温(15～30℃)。


Pfu DNA Polymerase 核酸扩增(PCR)关键词：Pfu DNA Polymerase,WE0107


·抗HA标签多克隆抗体
编号：WE0350
英文名称：Anti HA-Tag Rabbit Ployclonal Antibody
规格：20μl|100μl
该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的HA标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的HA-Tag融合蛋白。

抗体类型：兔多克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-20000)

·游离DNA样本保存管(10ml)
编号：WE0398
英文名称：Cell-Free DNA Storage Tube(10ml)
规格：5ml×5支|5ml×50支
游离DNA保存管可直接用于血样的采集与运输，并稳定其中的游离DNA(Cell-Free DNA)，是由EDTA抗凝剂和特殊的保护剂组成，能够有效抑制血浆中的核酸酶，并避免血液有核细胞中基因组DNA的释放。该产品适用于无创产前筛查与一些疾病的早期诊断相关的研究。
游离DNA保存管中血液样本可按大多数商业化试剂盒进行游离DNA提取，提取后的游离DNA可应用于下游的检测与分析。同时，该产品也能够用于血液有核细胞中的基因组DNA的保存。

·DNA产物快速纯化试剂盒
编号：WE0170
英文名称：DNA Product Quick Clean-up Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过离心吸附柱快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从PCR产物或酶反应液(酶切，连接，探针标记等)中纯化回收100 bp-10 kb的DNA片段，每个吸附柱最高可吸附10μg的DNA，同时最大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer PB	30ml	120ml
Buffer PS	15ml	60ml
Buffer PW(浓缩)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
离心吸附柱DM及收集管	50套	200套

产品特点
1、快速简单：操作步骤少，15分钟完成，同时可处理多个样品，节省时间。
2、回收率高：新型硅基质膜技术和试剂配方保证每次最大量回收到纯度极高的目的DNA。
3、处理量大：每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA 量为10μg。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2- 8℃。当溶液低温保存时,使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
2、本试剂盒可无选择性回收溶液中所有DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒(WE0168)
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer PB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、回收效率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
6、所有离心步骤均可室温下进行。

操作步骤：
1、估计DNA反应液的体积，加入5倍体积的 Buffer PB，充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油)。
注意：
1)如DNA反应体系为50μl(不包括石蜡油体积)，则加入250μl Buffer PB。
2)在加入Buffer PB后检测溶液的pH值，若pH值＞7.5，可向其中加入10-30μl的3 M醋酸*(pH5.0)，从而将pH值调到5-7。
2、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3、将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置1分钟，13000rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容积为750μl，若样品体积大于750μl可分批加入 。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)13000rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验(例如平末端连接实验或直接测序)，建议加入Buffer PW后静置2-5分钟再离心。
5、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
6、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加30-50μl Buffer EB，室温放置1分钟。13000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。
2)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
3)洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。
4)回收＞10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

储存条件：室温(15～30℃)。

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