北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价

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北京百奥莱博专业生产供应北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家
英文名：2×GC-rich PCR MasterMix
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：1ml
  本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥最大功效，实现对复杂模板的高保真、高效率扩增，独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高，有二级结构等的扩增，对简单模板有效扩增的片段可达20kb，对复杂模板可达10kb。

产品组成：

 

组份	1ml
2×GC-Rich PCR MasterMix	1ml
ddH2O	1ml

注意：2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×GC-Rich PCR MasterMix	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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·微量凝胶DNA回收试剂盒
编号：WE0169
英文名称：Gel DNA Extraction Micro Kit
规格：50次
  本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA片段，溶胶速度快，并利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积(可少至10μl)，从琼脂糖凝胶中，快速纯化50 bp-50 kb的DNA片段，纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而可获得高纯度、高浓度，完整性好的DNA，回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer PG	25ml
Buffer PS	15ml
Buffer PW(浓缩)	10ml
Buffer EB	10ml
离心吸附柱DE及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer PG如果出现结晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分钟，即可恢复澄清。
4、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果。
5、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
6、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
7、将水浴锅预热至50℃。
8、Buffer PG中含有pH指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA才能够有效的与膜结合，当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色，需要进行调整。

操作步骤：
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)，放入干净的离心管(自备)中，称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg，其体积可视为100μl，依此类推)。
3、50℃水浴温育，其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意：
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色，可进行后续操作；若胶溶液为桔红色或紫色，可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH5.0)，将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时，应加入1/2胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀(如凝胶重100 mg，则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DE中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序)，建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加10-50μlBuffer EB，室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
2)回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，可增加回收效率。

储存条件：室温(15～30℃)。


北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家关键词：WE0116,2×富含GC PCR MasterMix,2×GC-rich PCR MasterMix


·miRNA提取试剂盒
编号：WE0195
英文名称：miRNA Purification Kit
规格：50次
  本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA， 还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效抑制RNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

试剂盒组成：

组份	50次
TRIzon Reagent	60ml
Buffer RWT(浓缩液)	15ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


北京WE0116型2×富含GC PCR MasterMix价格厂家关键词：WE0116,2×富含GC PCR MasterMix,2×GC-rich PCR MasterMix

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