血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化
品牌：百奥莱博
英文名：RNAtiqu Circulating RNA Extraction Reagent
规格：50ml
  本品特别适用于从血清、血浆中分离纯化包括microRNA和其他小RNA(<200nt)在内的总RNA。本品灵活处理不同起始量的样品，在有效裂解样本的同时，可有效保存RNA的完整性，提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，提取的RNA可用于RT-PCR、Northern Blot和分子克隆等下游实验。

自备试剂：*仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有*酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
4、样品用游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂匀浆后，如不即刻加入*仿，置于-70℃可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213)对RNA进行处理。

操作步骤：
1、取200μl新鲜或者冻存的血清或血浆，加入3倍体积的游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂。振荡30秒，充分混匀。
注意：样本加入游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂后，可能会出现沉淀，经过振荡混匀后，沉淀基本消失。若仍有少量沉淀，不影响下游实验，可继续操作。
2、将处理后的样品在室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入*仿，每使用1ml血清/血浆样本专用总RNA提取试剂加入0.2ml*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。
注意：如不能涡旋混匀，可手动快速颠倒混匀2分钟。
4、4℃ 12000rpm离心20分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相转移到一个新的无RNase的离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置30分钟。或-20℃沉淀过夜，效果更佳。
6、4℃ 12000rpm 离心20分钟，弃上清。
注意：离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂加入1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

储存条件：2～8℃。

更多有关血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·RNase A溶液(100mg/ml)
编号：WE0225
英文名称：RNase A(100mg/ml)
规格：1ml

·Protein A+G琼脂糖凝胶
编号：WE0268
英文名称：Protein A+G Agarose
规格：1ml
  本产品为Protein A和Protein G 共价交联到Agarose beads上的产物，并保存在20%乙醇溶液中。本产品包含1ml protein A+G agarose和1ml 20%乙醇溶液，即为50%悬浮介质。主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。免疫沉淀抗体包括Mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA，Rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，Rabbit IgG，Rabbit and Goat polyclonal Abs，以及Human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本产品也可以用于抗体的纯化。

注意事项：
1、本产品保存在2～8℃ 20%的乙醇中，从低温取出后恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、使用前请充分颠倒若干次使混合均匀。

使用方法：

I 免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)：
1、蛋白样品的准备：
a. 对于细胞样品，用1×PBS洗涤一次。2×106细胞加入200μl细胞裂解液，以此类推。
b. 对于组织样品约20 mg加入200μl组织蛋白抽提试剂，以此类推。
注：如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释；如果蛋白样品浓度过低，可适当减少裂解液的用量。
2、取约200μg至1 mg蛋白样品，与0.2μg至2μg纯化后的抗体混合，4℃缓慢摇动过夜。
3、取20-40μl充分重悬的Protein A+G Agarose加入到一支新的1.5ml离心管中，短暂离心，小心吸弃上清。
4、加入500μl 1×PBS洗涤Protein A+G Agarose，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
5、将步骤2的抗原抗体复合物加入到洗涤后的Protein A+G Agarose中，4℃孵育1-3个小时，短暂离心，小心吸弃上清。
6、加入500μl 1×PBS洗涤，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
7、向沉淀中加入20-40μl 2×SDS-PAGE电泳上样缓冲液，涡旋重悬沉淀，短暂离心把样品离心至
8、蛋白煮沸变性5分钟，短暂离心后取部分或全部上清，用于SDS-PAGE电泳或Western Blot等。暂时不用的样品可在-20℃保存。

II 免疫共沉淀(CO-IP)：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(CO-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但以用新鲜的蛋白样品为佳。

储存条件：2～8℃，避免冻存。


血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化关键词：WE0201,血清血浆尿液游离RNA提取试剂,RNAtiqu Circulating RNA Extraction Reagent


·30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(29:1)
编号：WE0291
英文名称：30% Acr-Bis(29：1)
规格：2×250ml
  30%Acr-Bis(29:1)即30%的聚丙*(代"烯")酰胺-N,N"-亚甲双丙*(代"烯")酰胺(Acrylamide-N,N"-Methylene*(代"b")isacrylamide)的水溶液，其中Acrylamide与-N,N"-Methylene*(代"b")isacrylamide 的比例为29：1。本产品常用于配制各种浓度的变性及非变性聚丙*(代"烯")酰胺(PAGE)凝胶，进行常规的蛋白或核酸电泳实验，使用方便。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

 

SDS-PAGE 分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃


血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化关键词：WE0201,血清血浆尿液游离RNA提取试剂,RNAtiqu Circulating RNA Extraction Reagent


·SuperSYBR Mixture(高含量ROX校正染料)
编号：WE0135
英文名称：SuperSYBR Mixture(High ROX)
规格：5ml
  本品是专用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料、Mg2+和ROX II校正染料，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。
  本品所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异性的PCR扩增，显著提高了PCR的扩增效率。
  所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，本试剂盒中ROX校正染料含量较高，适用于ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等需要较高ROX信号进行校正的荧光定量PCR仪 。

试剂盒组成：

组份	1ml	5ml
2×SuperSYBR Mixture(High ROX)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

产品特点
1、本产品中使用了全新高效热启动酶BaldStar Taq DNA Polymerase与独特的PCR缓冲体系，显著提高PCR的扩增效率，具有高灵敏度和特异性强的特点。
2、适用于荧光定量PCR检测，能够准确地对目的基因进行定量和检测。

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有SYBR Green I荧光染料和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
5、配制反应液时，请使用新的或者无污染的枪头和离心管，尽量防止污染。

操作步骤：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR Mixture(High ROX)	2 5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)推荐反应体系为50μl，也可以根据实际实验需求按比例扩大或者缩小反应体系。

2、PCR反应程序：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

建议采用下表显示的两步法PCR进行程序设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例。若因Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR 扩增，三步法操作步骤详见《反应条件的优化》。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
3)本程序是以ABI 7900荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

反应条件的优化：
在荧光定量反应条件优化时，应从引物浓度、退火温度、延伸时间等方面进行考虑，以提高反应特异性和扩增效率。
1、反应特异性和扩增效率高的实验体系应具备以下条件：
1)反应特异性高：阴性对照无引物二聚体等非特异性扩增；不产生目的片段以外扩增。
2)扩增效率高：Ct值低；PCR扩增效率高，接近理论值100%。
2、反应条件优化方法：
1)引物浓度：通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。若提高反应特异性，可降低引物浓度；若提高扩增效率，可增加引物的浓度，由此优化反应体系。
2)退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)延伸时间：建议采用两步法PCR，延伸时间1 min进行反应。若提高扩增效率，可尝试将延伸时间增加，或尝试三步法PCR。
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

三步法荧光定量PCR(本程序是以ABI7900荧光定量PCR仪为例)：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	10 s	35-40个循环
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度。
3)若需提高反应扩增效率，可适当增加延伸时间。
4)本程序是以ABI 7900荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

北京百莱博科技有限公司专业生产RNA纯化产品，欢迎来电咨询选购血清血浆尿液游离RNA提取试剂 RNA纯化。