土壤微生物RNA提取试剂盒北京价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

土壤微生物RNA提取试剂盒北京价格由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多土壤微生物RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：土壤微生物RNA提取试剂盒北京价格
编号：BTN90704
规格：50次
英文名：Soil microbe RNA extraction kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
由于土壤中有机质含量丰富，尤其是其中的腐殖酸对 RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从土壤微生物提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本试剂盒就是为解决相关问题而研发设计的。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均 OD260/280一般都在 2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的土壤 RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

 

成分	A型
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
RNA溶解液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 称取 0.1-0.5 g的土壤，加入1mL溶液A，震荡器上剧烈震荡 5-10分钟。
 注意:一定要让管底的土壤震荡起来。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在 4℃ 放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇 匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡 30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温 12000rpm离心 3～5分钟。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下 100μl上清液不取。
6.在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备*仿，用手上下颠倒或振 荡器振荡 30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7.室温 12000rpm离心 3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
9.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡 30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
10. 13000-15000g室温离心 5-30分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色 RNA沉淀。
11.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。室温离心13000-15000g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
12. 重复第 11 步的75%乙醇清洗步骤一次。
13. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50μl)，用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。
14.室温短暂放置 2分钟，立即加入适量(一般为10-30μl)RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解。注意:千万不要用真空离心法使 RNA沉淀过于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳 ，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

我公司的土壤微生物RNA提取试剂盒北京价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·10M*化*溶液(RNase-Free)
编号：BTN100907
规格：250mL

·柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130845
英文名称：Mycobacteria RNA Column extraction kit
规格：50次

·dGTP溶液(100mM)
编号：BTN120619
英文名称：dGTP Solution(100mM)
规格：0.5mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。

dGTP分子式为C10H13N5O13P3Na3,分子量是507.2，消光系数为13.7×103 M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为253nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞
编号：BTN140390
英文名称：E.coli Y2HGold Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 酿酒酵母Y2HGold是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187 通过mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为：trp1，leu2，报告基因为：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1。

 Y2HGold-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1~174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768 ~881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。

 GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位*基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768~881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(G1，G2，M1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。

Y2Hgold的基因型是：MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ，LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3，GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1

产品组成：

成分	规格
Y2Hgold感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、 SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入2-5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)、500μl PEG/LiAc，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μl ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取50μl ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
4.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5. 同时转化2-3 种质粒时可增加质粒的用量。


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·PMSF溶液(10mg/mL)
编号：BTN100833
英文名称：PMSF Solution
规格：5mL
本产品为溶于异丙醇中的浓度为10mg/mL的PMSF溶液，其工作浓度为17-174μg/mL(0.1-1.0mmol/L)。PMSF在水液体溶液中不稳定，半衰期为110分钟(pH7.0)或35分钟(pH8.0)，所以在每一步骤中都必须新鲜加入本产品。本产品作用是抑制丝*酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：临用前室温融解本产品，混匀，按照合适比例加入到组织细胞裂解液中，一般建议工作浓度为0.1-1.0mmol/L。

注意事项：
1．PMSF 剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
2．PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解液中。

·三合一RNA上样液(B型,6X)
编号：BTN3130B
英文名称：RNA Loading Buffer
规格：1.5mL
本品是集RNA变性RNA、上样、RNA染色三种功能于一体的即用型溶液。

产品特点：
1．能提高RNA上样速度，免去繁琐的准备步骤，减少污染。
2．其含有的RNase抑制剂能抑制RNA样品中残留RNase的活性，保证电泳过程中RNA的完整性。
3．所含甘油和染料(仅BTN3130A含EB染料)，便于直接上样和UV观察RNA电泳条带，免去染色和脱色过程。
4．本产品与DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2完全兼容。

产品组成：

成分	规格
三合一RNA上样液	1.5ml
说明书	1份

本产品为红色液体，含红色的EB(*化乙锭)，有致癌性，避免用手直接接触。
另一红色电泳示踪剂的电泳速度相当于50nt的RNA。

储存条件：常温运输，4℃(短期)或-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按1:1-1:3的比例将RNA样品与RNA上样液混合(如5μL RNA+15μL RNA上样液)。
2. 65-85℃水浴保温10分钟,。
3. 冰浴5分钟后即可直接上样电泳。
 注：本产品含EB，所以琼脂糖凝胶中可以不必再加EB。本产品与甲醛琼脂糖变性凝胶或用DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2配制的非变性琼脂糖变性凝胶兼容。
4.电泳完毕后可直接将凝胶放在紫外灯下观察结果，RNA 条带成红色。

疑难解答：
Q：为何RNA样品在甲醛变性胶中的电泳效果比普通非变性胶差?
A：这是因为在非变性胶中，即使内部有切口的RNA分子(实际已经是两条RNA分子)也会通过形成发夹结构而跟完整的分子等速电泳，而在变性胶中，完整RNA分子和内部有切口的RNA分子将以不同的速度泳动，所以变性胶看起来效果不好是反应了真实情况，非变性胶看起来好只是一种假象。要求严格的实验(如CDNA文库构建)最好还是使用甲醛变性胶判断RNA的质量好坏。


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·电泳级SYBR Green I
编号：BTN3280
英文名称：SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
规格：50μL
SYBR Green I，EG是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA荧光染料，适用于各种核酸电泳分析。

产品特点：
1.低毒安全，其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。
2. 髙灵敏，SYBR Green I与dsDNA 结合，荧光信号会增强800-1000倍，至少可检出 20 pg DNA，灵敏度高于EB染色法10－25倍。
3.适用范围广，可适用于多种电泳分析，包括琼脂糖凝胶，聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与我司的SuperBuffer-2 兼容。
4. 不影响其它修饰酶(Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)作用。
5. 操作简单，无须脱色或冲洗。

储存条件：常低温运输，-20℃闭光保存，有效期一年。

使用方法之一：电泳前染色
 本方法是在上样时对DNA进行染色，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2. 按常规方法制备胶，胶的厚度最好不要超过5mm，胶中不能含任何染料。
3. 将100 X电泳前染色液与DNA样品(包括DNA Marker)按1：10的比例混合，室温放置10-15分钟，加上样液后上样。
4.上样后电泳。
5.在300nm的UV下观察。UV的功率最好为90W(15W X 6)，手持UV一般功率不够，难以得到满意的灵敏度。除300nm外，SYBR Green I还可以在500nm和380nm的激发光下观察(如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪)。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。
 注意：不要使用与EB 兼容的红色滤光片(能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。
7.后续Southern或Northern转膜或胶回收按常规操作进行。

使用方法之二：电泳中染色
 本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中，优点是不需要额外的染色处理，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中，使其终浓度在0.5-1X左右，混合均匀后倒胶，厚度最好不要超过5 mm。
2. 按常规方法上样和电泳。
3.电泳后观察和照相处理同方法一。
 注意：由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I在加热融化时会大量分解，所以琼脂糖凝胶最好需要多少配多少。

使用方法之三：电泳后染色
 本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE，检测灵敏度可达20 pg DNA，但该方法需要单独的染色处理。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用pH7.0-8.3的缓冲液(如：TAE，TBE或TE)将10000×SYBR Green I 稀释10000倍成1×电泳后染色液。
3. 将电泳后染色液倒入合适的聚丙*(代"烯")容器中，放入琼脂糖凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟。对聚丙*(代"烯")酰胺凝胶，可取下一块玻璃板，然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE胶板上，让染色液均匀地覆盖整个PAGE胶板，静置染色30分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4. 观察和照相处理同方法一。
 注意：电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小(胶越大，非特异吸附产生的损耗就越大)，一般可重复使用4次。

注意事项：
1. 融化：本产品溶于DMSO中，融化时一定要让其彻底融化，否则SYBRGreen I在液相和固相中浓度不均，影响实验的可重复性。
2. 容器：SYBR Green I 对聚丙*(代"烯")材料的亲和力非特意吸附最小，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙*(代"烯")类容器，容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙*(代"烯")容器。
3. 反复使用：由于凝胶和容器的非特意吸附，使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。
4. 稳定性：稀释后的SYBR Green I工作液体最适保存条件是闭光、密封、低温(4℃)、pH在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中，禁止用微波加热处理SYBR Green I。
5. 稀释液：可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I，包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2等。最好不要使用水和pH7.8(25℃)的Tris缓冲液。后者的pH在4℃时会升高到8.4。
6.其他影响因素：染色液中最好不要有SDS，也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙*(代"烯")容器时，0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I与DNA 结合。用deaza-G 替代G的DNA 不能有效染色。

疑难解答：
Q：DNA 条带为何出现弯曲或模糊？
A：DNA 过量，将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2小时，否则SYBR Green I 会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。电压不能太高，否则产热会影响SYBR Green I与DNA的结合。
Q：醇/盐沉淀法能否把结合在DNA上的SYBR Green I 去掉？
A：可以。其中乙醇效果最好，异丙醇次之。但正丁醇、*仿和*酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。
Q：用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern或Northern Blot？
A：可以，但最好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I与DNA 分开。
Q：能否用SYBR Green I染色膜上的DNA。
A：可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA，不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。

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