北京SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)价格

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名称：北京SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)价格
英文名：SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)
编号：WE0286
品牌：百奥莱博
  本产品为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

 

SDS-PAGE 分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	分离胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	浓缩胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃


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·抗V5标签单克隆抗体
编号：WE0343
英文名称：Anti V5 Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
V5标签是从猿病毒5(SV5)副粘病毒P蛋白和V蛋白中分离得到的由14个*基酸残基组成的多肽(GKPIPNPLLGLDST)。该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的V5标签，不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的V5-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：500-5000)、ELISA(1：1000-10000)

·大片段Bst DNA聚合酶
编号：WE0236
英文名称：Bst DNA Polymerase, Large Fragment
规格：800U|4000U
  本品是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，其基因来源于Bacillus stearothermophilus，并在原始序列的基础上进行了部分点突变。该蛋白 具有5"→3" DNA聚合酶活性，无5"→3"和3"→5"核酸外切酶活性，具有强链置换活性。应 用于DNA等温扩增(LAMP)、多重置换扩增(MDA)、全基因组扩增(WGA)、建 库测序等。

·血液基因组DNA批量提取试剂盒(96孔板)
编号：WE0188
英文名称：Blood Genomic DNA Batch Extraction Kit
规格：4×96次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(带有抗凝血剂，如柠檬酸盐、EDTA或肝素等)、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中的总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本试剂盒广泛的应用于临床样品的检测，可以同时处理96个样品，采用96孔吸附板可以特异性吸附结合DNA，经过纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、Real-Time PCR、酶切和Southern Blot等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer RCL	2×500ml
Buffer GR	2×50ml
Buffer GL	2×50ml
Buffer GW1(浓缩液)	2×52ml
Buffer GW2(浓缩液)	2×50ml
Buffer GE	60ml
蛋白酶K	90 mg
蛋白酶K 储存液	2×5ml
吸附板及收集板	4套
收集板	4块
封板膜	16张

保存条件：Buffer RCL 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入9ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
5、实验前配制Buffer GL与蛋白酶K 的混合溶液，每200μl Buffer GL中加入20μl蛋白酶K ，该溶液最好现用现配，在使用前配制时间最多不超过1小时。
6、使用排枪时注意不要打湿96孔板孔口，以防止离心过程中有液体溅出产生交叉污染。

操作步骤：
1、样本处理：
a. 将200μl样本加到收集板中。不足200μl的样本，加Buffer GR补足至200μl。
b. 样本超过200μl，且不超过600μl时，将血液样本加到收集板中，加入样本2倍体积
的Buffer RCL，吹打20次混匀，加盖新的封板膜，3600 rpm(～1200×g)离心10分钟。揭去封板膜，吸弃上清(可留下100μl液体以避免吸到细胞沉淀)。再加入样本2倍体积的Buffer RCL，吹打10-20次混匀，加盖新的封板膜，3600 rpm离心10分钟。揭去封板膜，吸弃上清，剩余约200μl液体。
注意：
1)在收集板上做好标记，以方便后续实验对样品的辨识。
2)如果样品为鸟类的血液，建议样品用量少于10μl。
2、配制Buffer GL与蛋白酶K 的混合溶液：按照200μl Buffer GL中加入20μl的蛋白酶K 的比例配制，混匀。
3、向每孔中加入220μl Buffer GL与蛋白酶K 的混合溶液，吹打20次，混匀。加盖新的封板膜，短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
4、56℃孵育10分钟。
注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
5、揭去封板膜，加入200μl无水乙醇，吹打20次，混匀。短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
6、将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集板的吸附板中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。3600 rpm离心5分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
7、向吸附板每孔加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇)，3600 rpm离心5分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
8、向吸附板每孔加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，3600 rpm离心5分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
9、3600 rpm离心10分钟，倒掉收集板中废液。将吸附板置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附板中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附板置于一个新收集板中，向吸附板每孔中间部位悬空加入80-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，3600 rpm离心10分钟，收集DNA溶液，加盖新的封板膜。-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·PVDF膜(0.22μM)
编号：WE0300
英文名称：PVDF Membrane(0.22μM)
规格：1 sheet

·罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0374
英文名称：Goat Anti-Rat IgG, TRITC Conjugated
规格：100μl
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，稳定性好。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)

·HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号：WE0394
英文名称：Goat Anti-Rabbit IgG, HRP Conjugated
规格：100μl
本产品为辣根过氧化物酶标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别兔IgG，检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应，可用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。HRP即辣根过氧化物酶，可以催化DAB、TMB等底物显色或催化ECL等化学发光试剂产生化学反应而发光。

免疫原：兔IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：无(叠氮*是HRP抑制剂，抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围：
WB(1：2000-10000)
ELISA(1：2000-20000)
IHC(1：100-200)


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·HRP标记抗His标签多克隆抗体
编号：WE0341
英文名称：Anti His-Tag Rabbit Polyclonal Antibody, HRP conjugated
规格：100μl
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗His标签兔多克隆抗体，可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的六个连续组*酸标签，而不受邻近*基酸组成影响，可用于检测His-Tag融合蛋白。产品经HRP直接标记，无需使用二抗，可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白，减化了实验步骤，避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。

抗体类型：兔IgG
免疫原：人工合成多肽
标记物：HRP
应用范围： WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-20000)

·磁珠法血液DNA提取试剂盒
编号：WE0208
英文名称：MagBeads Blood DNA Extraction Kit
规格：96次
  本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的血液DNA提取方法，适用于从新鲜或冷冻抗凝血(柠檬酸盐、EDTA、肝素处理过的血液样品)中提取血液DNA。在离液盐存在时，DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。经两步漂洗以及一步快速漂洗(MW3的快速漂洗对于提高DNA纯度有很大帮助)后，高纯度的DNA被洗脱于EB或去离子水中。DNA得率与样品的类型，储存条件、时间以及样品中白细胞的含量有很大关系。纯化得到的DNA纯度好(260/280的比值在1.7-1.9之间，260/230的比值大于1.5)，完整度高(最高可达50 kb)，可用于克隆，定量PCR，芯片测序等下游反应。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer ML	24ml
Buffer GW1(浓缩液)	80ml
Buffer GW2(浓缩液)	50ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	1ml

自备仪器及试剂：

1、手动单管操提取：
1)恒温混匀仪
2)2/15ml磁力架
3)异丙醇、无水乙醇

2、手动96孔深孔板提取：
1)恒温混匀仪
2)废液抽吸系统
3)手动连续分液器
4)电动连续分液器
5)手动连续分液器分液管(25ml)
6)96孔深孔板磁力架
7)异丙醇、无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、异丙醇与Magbeads混合物的制备(以制备提取10个样品所需量为例)
1)向合适容量(加入异丙醇和Magbeads后总体积小于离心管容积的2/3)的离心管中加入3.3ml【0.3×(10+1)=3.3】的异丙醇。
注意：如用移液器加入异丙醇，需用移液器将枪头在异丙醇吹吸两次后再缓慢吸取异丙醇。
2)向上一步的离心管中加入220μl【20×(10+1)=220】Magbeads
注意：Magbeads加入前需涡旋振荡20秒使其充分混匀，异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡20秒钟使其成为均一的溶液。
3)异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡10秒钟使其成为均一的溶液。
3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
4、样品应避免反复冻融，否则会导致提取得到的DNA片段较小且提取得率低。
5、次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
6、如Buffer ML中出现沉淀，请在56℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
7、实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

操作步骤：

一、手动单管操作：
1、向1.5ml的离心管中加入20μl 蛋白酶K ，之后加入200μl的血液。
注意：
1)冷冻抗凝血液需提前在室温(15～30℃)下放置，融化混匀。
2)如血液体积大于或小于200μl，蛋白酶K 、Buffer ML和异丙醇与磁珠混合物的用量需按比例调整。
2、向离心管中加入200μl Buffer ML，涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后，将离心管放于56℃水浴锅中孵育15分钟，期间涡旋震荡混匀2次。
3、将离心管从水浴锅中取出，短暂离心后室温放置5分钟。加入彻底混匀的320μl异丙醇与Magbeads混合物，涡旋震荡混匀5秒钟后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀
仪上震荡混匀5分钟或将离心管连续颠倒混匀10分钟。
4、将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
5、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、重复步骤5。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上)，之后彻底弃去无水乙醇。
10、将离心管从磁力架上取下，加入50-200μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作：
1、向2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中加入20μl 蛋白酶K ，之后加入200μl血液，并记录每孔中所加血液名称。
注意：
1)可将蛋白酶K 预先分装于8连管中，每管加入260μl。之后，用8通道移液器将蛋白酶K 分装于96孔深孔板中。
2)血液需加到96孔深孔板的底部，避免血液触碰到孔的上部。
2．向深孔板中用电动连续分液器或8通道移液器加入200μl Buffer ML。
3．将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟，盖上硅胶盖后将深孔板放于56℃水浴锅中孵育15分钟，之后再将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪上取下，用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入彻底混匀的320μl Magbeads与异丙醇混合物。盖上硅胶盖后，立即将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
5、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
注意：用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值，使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
6、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
7、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
8、重复步骤6-7。
9、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
10、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
11、重复步骤9-10。
12、用手动连续分液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
13、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
14、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
15、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入100-200μl Buffer EB，之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热，洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
16、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)

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