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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
SuperPure RNA Extraction Kit
- 库存:
499
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货超纯RNA提取试剂盒哪里卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多超纯RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货超纯RNA提取试剂盒哪里卖
规格:50次|200次
品牌:百奥莱博
英文名:SuperPure RNA Extraction Kit
编号:WE0192
产地:国产|进口
本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,裂解液充分裂解并匀质化样本,采用独特的硅基质膜吸附技术,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的RNA,同时最大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等;可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA,每次可处理 30-50 mg组织或5×106细胞,可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| TRIzon Reagent | 60ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其他组分室温(15~30℃)。
自备试剂:*仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。
产品特点:
1、纯度高:最大限度除去蛋白质等杂质,提取的RNA可直接用于下游各种实验。
2、提取量大:独特的裂解液配方,充分裂解细胞或组织,RNA提取量多至100μg。
3、快速:步骤少,操作简单,节省时间。
4、兼容性强:适用于多种动植物组织和细胞RNA的提取。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
6、若下游实验对DNA非常敏感,建议用不含RNase的DNase I(货号:WE0213S)对RNA进行处理。
操作步骤:
1、样品处理
①植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon Reagent中迅速研磨,每30-50 mg组织加入1ml TRIzon Reagent,混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。
②动物组织:取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎,每30-50 mg组织加入1ml TRIzon Reagent,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon Reagent 1ml混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。
③单层培养细胞:吸去培养液,可直接在培养板中加入适量TRIzon Reagent(每10cm2 面积需要1ml TRIzon Reagent),用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后,将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中,300×g离心5 min,收集细胞沉淀,仔细吸除所有上清,加入TRIzon Reagent 1ml混匀。
注意:
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRIzon Reagent加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定。如果TRIzon Reagent加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则会导致裂解不完全,造成RNA的产量降低。
④细胞悬液:离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon Reagent。
注意:
1)加入TRIzon Reagent前不要洗涤细胞,以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
⑤血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积的TRIzon Reagent(推荐0.25ml全血加入0.75ml TRIzon Reagent),充分振荡混匀。
⑥可选步骤:对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品,如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎,可以在匀浆处理后4℃,12000rpm(~~13400×g)离心10分钟以除去不溶物质,此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA,而RNA存在于上清中。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿的比例加入*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心10分钟,此时样品分为三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在上层水相中,将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制),颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入700μl Buffer RW1,12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、重复步骤8。
10、12000rpm离心2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤11。
储存条件:室温(15~30℃)。
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北京现货超纯RNA提取试剂盒哪里卖关键词:SuperPure RNA Extraction Kit,WE0192,超纯RNA提取试剂盒
·抗β-Tubulin单克隆抗体
编号:WE0355
英文名称:Anti β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody
规格:100μl
微管是细胞骨架的重要组成部分,存在于所有哺乳动物细胞。它由分子量约55kD的α微管蛋白(α-Tubulin)和β微管蛋白(β-Tubulin)组成,并以αβ异源二聚体的形式存在。其中β-Tubulin蛋白表达水平相对恒定,常被用于Western Blot检测时校正系统的内参照。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG
免疫原:人工合成人β-Tubulin C末端多肽
应用范围:
WB(1:500-5000)
IHC(1:50-500)
ELISA(需摸索最佳稀释度)
应用种属:人,小鼠,果蝇,非洲蟾蜍,袋鼠,衣藻
·PCR Mix(含染料)(滴瓶装)
编号:WE0100
英文名称:PCR Mix(With Dye)
规格:5ml
本产品以滴瓶包装,集成了PCR反应所需各要素及稳定剂、增强剂,对PCR反应中各成份的浓度有较高的宽容度,无需加样工具,将本产品直接滴入加有模板、引物的PCR管即可完成反应准备。本产品热稳定性高,启封后置2~8℃保存,六个月内可随时取用。本产品使用高度封闭的热启动DNA聚合酶,可有效减少非特异PCR产物扩增,配制PCR反应体系可在室温进行,但须注意热循环程序的第一步必须包括至少10分钟的95℃热启动。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因;2~8℃存放六个月,活性无明显改变。
使用方法:
本产品以滴瓶包装,使用时,取掉旋盖后将滴瓶倒置,滴塞口对准已加入适量模板和引物的PCR管口上方,以食指和拇指轻轻挤压滴瓶,滴入一滴反应液,即可完成PCR反应准备。正常挤压时,液滴平均体积约为25μl,可能会因挤压滴瓶用力不一,造成挤出液滴体积存在差异,但对多数PCR反应,均可获得良好扩增。
1、PCR反应体系:
| 试剂 | 反应体积 |
| PCR Mix | 1 滴 |
| Forward Primer,10μM | 1μl |
| Reverse Primer,10μM | 1μl |
| Template DNA | ≤4μl |
注意:
1)引物浓度以10μM作为参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2)PCR模板的使用量应视DNA性质加以调整。一般而言,在每滴PCR反应中,当模板为质粒DNA时,以1 pg至10ng为宜;当模板为细菌基因组DNA时,以1ng至100ng为宜;当模板为真核生物基因组DNA时,以10ng至300ng为宜。需注意,PCR模板绝非越多越好。过多的模板会对PCR反应产生抑制作用,且容易增高其它抑制物水平,影响扩增效果。
2、PCR反应条件:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)产品含有高度封闭热启动DNA聚合酶,须在预变性95℃,10 min条件下实现酶的活化。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
3)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品的扩增效率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物下游应用设定循环数。如循环次数太少,扩增量不足;如循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,有效期2年
北京现货超纯RNA提取试剂盒哪里卖关键词:SuperPure RNA Extraction Kit,WE0192,超纯RNA提取试剂盒
·SDS-PAGE快速电泳液
编号:WE0277
英文名称:Fast SDS-PAGE Running Buffer(10×)
规格:500ml
SDS-PAGE是蛋白质科学研究中最为常用的技术之一,使用常规SDS-PAGE电泳缓冲液(TG,Tris-Glycin系统)进行电泳时,电泳所需的时间一般为90分钟左右(mini胶),应用本产品可使同样的mini胶的SDS-PAGE所需的电泳时间缩短至20-30min,同时电泳后的条带较使用常规的TG电泳缓冲液所跑出的条带分辨率提高且更加清晰。本产品的使用非常简单,只需将您使用的常规TG电泳缓冲液系统更换为本产品的稀释液,调整电压后进行电泳即可,无需添加任何实验步骤。同时稀释为工作液的本产品可重复使用4-5次。本产品既可节省您宝贵的时间也可降低您的实验成本。
注意事项:
1、操作时请务必佩戴手套,如溅到皮肤上,请立即用大量水冲洗。
2、本产品中含有SDS,适合变性凝胶电泳,不适合非变性凝胶电泳。
3、应用本产品所进行的SDS-PAGE的结果显示,本产品的应用会使蛋白的分辨范围发生变化,同等浓度的凝胶,其分辨的最低分子量要小于使用TG电泳缓冲液(见下表)。
操作步骤:(以Bio-Rad mini胶及相关配套设备为例)
1、本产品为10倍浓缩液,使用时用纯水10倍稀释后配制成工作液(例如:取100ml本产品后用纯水定容至1 L)。
2、将适量的本产品加入到电泳槽的内、外槽中,调整电源为恒压200-250 V进行电泳。电泳指示剂*酚蓝至凝胶底部,所需时间约20-30 min。
3、电泳完成后收集电泳槽内、外槽电泳液,4℃保存,可重复使用4-5次,但如发生浑浊请勿使用。
表1 速泳电泳液与常规TG电泳液的最佳分辨率的比较
| 凝胶浓度 | 速泳电泳液 | 常规TG电泳液 |
| 8% | 20-250 kDa | 50-325 kDa |
| 10% | 15-140 kDa | 30-180 kDa |
| 12% | 10-80 kDa | 20-140 kDa |
| 15% | 5-70 kDa | 12-100 kDa |
储存条件:室温
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