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liquid reagent
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现货
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柯雷生物
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100T
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文献和实验目的要求 1.熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤 2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布 基本原理 酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)主要存在于巨噬细胞,定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时,底物不易渗入,ACP活力微弱或无活性,经固定,在合适pH条件下,膜本身变为不稳定,逐渐改变其渗透性,底物可以渗入,酶活力被显示。 ACP在酸性条件
酸性磷酸酶金属盐―铅法 酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)广泛分布于机体各种组织细胞内,主要存在于细胞的溶酶体内.常作为溶酶体标志酶,此外,还存在于内质网和胞质内。在组织退行性变、核酸和蛋白质代谢活动增加时,酸性磷酸酶活性增强。酸性磷酸酶还参与酯类代谢。因此,它在疾病、免疫反应和细胞损伤与修复过程中具有一定生物学意义。 其基本原理是在酸性环境下,底物p―甘油磷酸钠被酸性磷酸酶水解,释放出磷酸,磷酸遇铅离子则生成磷酸铅沉淀,最后与硫化铵作用形成棕褐色硫化铅沉淀。其反应
酸性磷酸酶重氮盐后偶联法: 与碱性磷酸酶相同。重氮化和偶联 反应多在碱性溶液中和低温条件下进行。在酸性溶液中容易分解。所以酶 作用与偶联反应分两步进行。 1)孵育液配制 磷酸―6―苯酰-2-萘钠 25rug 蒸馏水 80ml Wapoll醋酸缓冲液(pH 5.0) 20ml 氯化钠 2g 重氮
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