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        酸性磷酸酶重氮盐后偶联法

        互联网

        2063
        酸性磷酸酶重氮盐后偶联法:
         
            与碱性磷酸酶相同。重氮化和偶联 反应多在碱性溶液中和低温条件下进行。在酸性溶液中容易分解。所以 作用与偶联反应分两步进行。
         
            1)孵育液配制
            磷酸―6―苯酰-2-萘钠         25rug
            蒸馏水                       80ml
            Wapoll醋酸缓冲液(pH 5.0)    20ml
            氯化钠                       2g
            重氮盐溶液配制:
            坚牢蓝B盐                   50rug
            蒸馏水                       50ml
            加碳酸氢钠使之碱化。
         
            2)染色程序:
            ①用新鲜或冷福尔马林固定的组织进行恒冷箱切片:
            ②切片人孵育液中,室温孵育10―60分钟(新鲜组织切片),或1~2小时(固定后组织切片);
            ③新鲜组织切片用冷生理盐水洗3次,固定后的组织切片用蒸馏水洗3次;
            ④放人新鲜配制的冷重氮液中,搅动3~5分钟;
            ⑤用冷生理盐水或蒸馏水洗3次,每次5分钟;
            ⑥甘油明胶封固。
         
            3)结果:酶活性部位显示蓝色。
         
            4)对照实验:与铅法相同。
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