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- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
1 ml
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文献和实验一般先配制50倍的TAE缓冲液，用时再稀释成1倍的。 50倍TAE缓冲液的配制方法为 1. 称取下列试剂于1L烧杯中： Tris 242g Na2 EDTA.2H2 O 37.2g 2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。
2～4 h，使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连； 免疫沉淀反应后，在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3～4 次；最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液，沸水煮 5 分钟； SDS-PAGE，Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
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