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- 2025年11月26日
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文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
xiayuxue 请问小分量的蛋白比如14KD,用三抗是不是更好？ xiayuxue 用 三抗有什么优势啊？请大家帮帮忙，wb怎么也做不出来小分子量的 roy2929 三抗一般就是放大信号吧 做不出来的原因很多啊 不说详细点不好讲 xiayuxue 我就是想请教大家，在什么情况下才用三抗？ ronaldo_zj 楼主您好
电泳过程同样很重要啊。电转的时候其实只要预染marker只要转到膜上了，那么你的相应分子量的目的蛋白也就转过去了，所以这就是你摸索条件的指示带。3、电泳过程中有推荐TRICINE-SDS-PAGE胶来进行电泳，会更有利于小分子量蛋白的分离，研读了一些文献，这个效果应该还是很肯定的，但是鄙人没有做过这种电泳，所以给不了什么经验，我最终还是用普通SDS-PAGE胶做出来的，不过鉴于我的蛋白分子量是11KD，那么假如你是几KD甚至更小分子量的多肽，那么还是建议你用TRICINE-SDS-PAGE胶来电
