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- 2025年12月20日
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12个月
- 供应商：
凯基生物
- 规格：
20 tests
实验类型: PCR
检测方法: 琼脂糖凝胶电泳
保存条件:-20℃保存12个月
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文献和实验请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分？
各位老师： 您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行 RNA 功能研究的看家本事。 众所周知，逆转录的应用领域有以下 6 种： 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 定量RT-PCR（RT-qPCR） cDNA 克隆和文库构建 cDNA 末端快速扩增（RACE） 基因表达芯片 RNA 测序（RNA-Seq） 今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对 6 种不同的应用时，如何正确选择逆转录酶。 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 在 RT-PCR
