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- WE0197-GIA
- 2025年07月15日
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- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
- 库存：
394
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括血液RNA提取试剂盒(含DNase I)厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。
名称：血液RNA提取试剂盒(含DNase I)厂家
编号：WE0197
英文名：RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：50次
本试剂盒适用于从新鲜全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)中提取总RNA，可处理多至1.5ml的全血，洗脱得到分子量大于200 bp的高纯度RNA，多个样品可以在1小时内同时完成。本产品无需CsCl纯化的超离心步骤和LiCl或乙醇沉淀，不含有*酚或*仿等有毒溶剂，经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶抑制剂和污染物，可直接用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| Buffer RBL(10×) | 60ml |
| Buffer RL | 35ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FL及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。
自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融，否则影响提取RNA提取得率和质量。样品在Buffer RL中，可于-70℃保存一个月。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀，可置于于56℃水浴重新溶解。
6、本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样本RNA的提取。
7、10×Buffer RBL需在使用前将溶液用无RNase的水进行10倍稀释，稀释后置于2～8℃保存。
操作步骤：
1、向新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍)，轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15分钟，孵育过程中混匀两次。
注意：孵育过程中浑浊的悬液会变成透明，证明红细胞被裂解，必要时可以把孵育时间延长至20分钟。
2、4℃ 2,100 rpm(~400×g)离心10分钟，小心吸弃上清。
3、向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍)，轻轻涡旋，充分重悬沉淀。
4、4℃ 2,100 rpm离心10分钟，小心并彻底吸弃上清。
注意：此步一定要完全去除上清否则影响裂解导致RNA产量下降。
5、向沉淀中加入Buffer RL(使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇)，具体加量按照下表进行，涡旋混匀。
注意：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的数量来确定所需Buffer RL的加入量。完全混匀后细胞应完全裂解，块状沉淀消失。
| Buffer RL(μl) | 健康人类全血(ml) | 白细胞数量 |
| 350 | 小于0.5 | 多至2×106 |
| 600 | 0.5-1.5 | 2×106 至1×107 |
6、将以上所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，收集滤液，弃掉过滤柱。
7、向滤液中加入1倍体积(600μl或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制)，混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
8、将上步所得溶液全部加入到吸附柱中(已装入收集管)，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
11、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
12、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
16、将吸附柱置于一个新的RNase-Free的1.5ml离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water再次洗脱，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
储存条件：室温(15～30℃)。
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血液RNA提取试剂盒(含DNase I)厂家关键词：WE0197,含DNase I,RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I),血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
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血液RNA提取试剂盒(含DNase I)厂家关键词：WE0197,含DNase I,RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I),血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
·超纯RNA提取试剂盒(DNase I)
编号：WE0193
英文名称：SuperPure RNA Extraction Kit(DNase I)
规格：50次
本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒，本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本，在特有的高盐状态下，RNA特异性地与硅基质结合，在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染，得到的RNA纯度更好，质量更高。本产品可从各细胞或组织中快速提取总RNA，每次可处理 30-50 mg组织或 5×106 细胞，可同时处理多个不同样品。如果是对微量DN非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除，提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| TRIzon Reagent | 60ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。
自备试剂：*仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤：
1、样品处理
① 组织：30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1ml TRIzon Reagent，或在组织样品中加入1ml TRIzon Reagent后匀浆处理。
注意：样品体积不超过TRIzon Reagent体积的10%。
② 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量 ，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent。
③ 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106细胞加入1ml TRIzon Reagent。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿的比例加入*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心10分钟，此时样品分为三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制)，颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
9、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
10、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
12、重复步骤11。
13、12000rpm离心2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
14、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤14。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤14。
储存条件：室温(15～30℃)。
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