BAmp DNA Polymerase厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖BAmp DNA Polymerase厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：BAmp DNA Polymerase厂家
品牌：百奥莱博
规格：500U
英文名：BAmp DNA Polymerase
编号：WE0105
产地：国产|进口
  BAmp DNA Polymerase在具有5"-3"DNA聚合酶活性的同时具有3"-5"外切酶活性，是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面，其优势更加明显，所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力，保真度高于普通Taq酶。优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂(C-Solution)使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于高保真度的长片段PCR扩增和复杂模板的PCR扩增，如构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。

产品组成：

 

组份	500U
BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml
5×C-Solution(PCR Enhancer)	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
5×C-Solution	10μl	1×
ddH2O up to	50μl

注意：
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)当利用常规条件仍然未能得到扩增时，可以加入5×C-Solution(PCR Enhancer)，PCR增强剂可以使富含GC，有二级结构和重复序列的复杂模板到高效扩增，可以提高反应的特异性。但PCR增强剂也有可能使常规条件成功扩增的反应扩增失败，因此第一次使用PCR增强剂时建议设置一个不加PCR增强剂的对照。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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磷霉素* dATP,2Na 26016-99-9
DL-4-羟基-3-甲氧基扁桃酸  L-Aspartic acid sodiu*(代"m") salt 55-10-7
N-乙酰-DL-蛋*酸 4-Methylcatechol 1115-47-5
BAmp DNA Polymerase厂家关键词：BAmp DNA Polymerase,WE0105


·一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
编号：WE0149
英文名称：BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit(Low ROX)
规格：100次
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0148-100次	WE0149-100次	WE0150-100次
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	100μl	100μl	100μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。


使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(可选)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s

注意：
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


BAmp DNA Polymerase厂家关键词：BAmp DNA Polymerase,WE0105


·防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)
编号：WE0126
英文名称：Multiplex PCR MasterMix(UNG)
规格：1ml
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs(含dUTP)、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸 索即可轻松进行多重PCR反应。
  本产品所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效 减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反 应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有 助于实现“困难”模板(比如，高GC含量的模板)的高效扩增。本产品运用dUTP-UNG 防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导 致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU 碱基PCR产物的形成。
  本品可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污 染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。


·蛋白标准溶液BSA
编号：WE0274
英文名称：Protein Standard Solution(BSA)
规格：5ml
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs(含dUTP)、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本产品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸 索即可轻松进行多重PCR反应。
  本产品所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效 减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反 应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有 助于实现“困难”模板(比如，高GC含量的模板)的高效扩增。本产品运用dUTP-UNG 防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导 致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU 碱基PCR产物的形成。
  本品可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污 染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。

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