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- 详细信息
- 文献和实验
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786
- 英文名:
Tissue Protein Extraction Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")组织蛋白抽提试剂盒哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:组织蛋白抽提试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:Tissue Protein Extraction Kit
规格:25次|100次
本试剂盒应用于组织样本的总蛋白提取。提取蛋白之前可根据具体实验需要加入蛋白酶抑制剂、盐、还原剂、螯合剂等成分。使用该提取液提取的组织蛋白,可进行蛋白活性分析、免疫检测、蛋白纯化等下游操作,并可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物,可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。
试剂盒组成:
| 组份 | 25次 | 100次 |
| Tissue Protein Extraction Reagent | 25ml | 100ml |
| Protease Inhibitor Cocktail | 250μl | 1ml |
保存条件:Protease Inhibitor Cocktail:-20℃,其它组分:室温
注意事项:
1、本产品适用于提取心肌、骨骼肌、肾脏、前列腺、皮肤、结肠、肝脏等软组织。
2、为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。
3、使用本产品提取蛋白后,可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。
4、为了获得实验最佳效果,请根据实验调整最佳使用量。
使用方法:
1、请在实验前取出Tissue Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、取适量Tissue Protein Extraction Reagent,抽提蛋白2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail,即1×工作液。
3、1 g组织加入10ml 1×工作液匀浆处理(抽提试剂的使用量可根据组织不同而调整)。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
4、冰上孵育20分钟(冰上放置时间可根据组织不同而调整)。
5、10000×g 离心15-20分钟。
6、转移上清至新管中,进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。
储存条件:-20℃
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除组织蛋白抽提试剂盒哪里卖外,我公司正在打折促销以下产品:
·尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)
编号:WE0115
英文名称:Uracil-N-Glycosylase(UNG)
规格:200U|1000U
尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),通过大肠杆菌表达纯化的重组酶,该蛋白分子量为25kD,可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,并且对RNA无活性,主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为:在PCR反应中以dUTP代替dTTP,扩增产物片段中的T全部被U取代,形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键,降解反应体系中含U的DNA,有效消除PCR产物的残留污染,大大降低扩增产物污染导致的假阳性,从而保证扩增的特异性和准确性。
活性定义:37℃,60分钟内催化1 nmol尿嘧啶,从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
质量控制:SDS-PAGE检测纯度大于95%;经检测无核酸内、外切酶活性。
注意事项:
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存,每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融,大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子,一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一,使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测,T-DNA仍会积累,此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施,为了防止PCR产物的污染,尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时,必须严格规范实验室的划分和操作。
使用方法:
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法,实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| Taq PCR Buffer,10× | 5μl | 1× |
| dATP,10 mM | 1μl | 200μM |
| dGTP,10 mM | 1μl | 200μM |
| dCTP,10 mM | 1μl | 200μM |
| dTTP,10 mM | 0.5μl | 100μM |
| dUTP,10 mM | 1μl | 200μM |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | Xμl | |
| Taq DNA Polymerase,5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| Uracil-N-Glycosylase,1 U/μl | 0.2μl | 0.2 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
2、反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| UNG消化 | 37℃-50℃ | 5-10 min | |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中,先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟,然后95℃ 10分钟灭活,(同时这一步也达到预变性和热启动的效果),随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃,5-10分钟的范围内变化,可以根据实验的需要进行调整。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
组织蛋白抽提试剂盒哪里卖关键词:Tissue Protein Extraction Kit,WE0260,组织蛋白抽提试剂盒
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组织蛋白抽提试剂盒哪里卖关键词:Tissue Protein Extraction Kit,WE0260,组织蛋白抽提试剂盒
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·HRP标记驴抗兔IgG(H+L)
编号:WE0366
英文名称:Donkey Anti- Rabbit IgG,Peroxidase Conjugated
规格:100μl
本产品为过氧化物酶标记的经亲和纯化的驴抗体,特异识别兔IgG,检测灵敏度高,本底低,可用于Western Blot、ELISA 和免疫组化检测。酶标记抗体,是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学各个分支学科中的免疫化学制剂,具有特异、敏感和安全的特点。
免疫原:兔IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:无(叠氮*是HRP抑制剂,抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围:
WB ECL发光检测(1:10000-200000)
ELISA(1:5000-100000)
WB 显色检测(1:5000-100000)
Immunohisto/cytochemistry(1:500-5000)
·血块基因组DNA提取试剂盒
编号:WE0185
英文名称:BloodClot Blood DNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒供了一种快速、简单、高效的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液,也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后,DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后,高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶抑制剂和其他杂质的残留,A260/A280的比值在1.5-2.3。DNA最长可达50 kb,适用于PCR,Real-time PCR、Southern blotting等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer GTL | 15ml |
| Buffer GC | 15ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
| Buffer PW2(浓缩液) | 18ml |
| Buffer GE | 15ml |
| 蛋白酶K | 25mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
| 吸附柱DC及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇
产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀,彻底去除污染物及下游反应抑制物,快速提取高品质DNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇,混合均匀,并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃,另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。
操作步骤:
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液,然后再加入180μl Buffer GTL。
注意:若样品数量较多,蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合,然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中,剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟,期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC,彻底涡旋混匀。短暂离心后,70℃孵育10分钟,期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意:加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀,大部分情况下,在孵育过程中,沉淀会消失,沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇,轻轻颠倒混匀样品,室温放置5分钟。短暂离心,将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意:
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时,需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,12000rpm(~13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液,将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温放置2-5分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE,室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,室温放置5 min后再次离心;若洗脱体积小于20μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
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