- ¥690
- Ybscience
- 中国/上海
- YB130857-2000
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存，
- 保质期：
一年
- 英文名：
T4 RNA Ligase 2(truncated K227Q)
- 库存：
大量
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
2000U/盒
产品及特点：
T4 RNA 连接酶 2（截短型 K227Q），又称T4 Rnl2tr K227Q， 可特异地将5 末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA 3 OH 末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷化的接头。T4 Rnl2tr K227Q 是 T4RNA 连接酶 2 截短型 的点突变体，K227 的突变减少了酶、赖氨酰及腺苷复合物的形成，也降低了非特异性的连接产物(多连体和环状体) ，后者可能是通过降低该酶从接头向RNA5磷酸基转运腺苷基团的微量活性而实现的。 该酶在连接反应中，无需 ATP，利用预腺苷化的接头和降低的酶-赖氨酰腺苷化活性能将连接背景降为最低。此酶已被用于 microRNA 克隆中接头的优化连接。
1. 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3 末端
2. 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 克隆文库构建
3. 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异 cDNA 文库构建
4. 无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。
T4 RNA 连接酶 2 （截短型 K227Q）-T4 RNA Ligase 2(truncated K227Q)反应条件
1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ，10 mM
MgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。
随酶提供试剂
单位定义
200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时将 80% 的 31-mer RNA连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [通用 miRNA 克隆接头] 所需的酶量。5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´
Buffer成分
10 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，0.1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50%Glycerol，pH 7.5 @ 25℃
热失活
65℃ 加热 20 分钟。2 X Taq MasterMixture（20x1ml）不含染料
2 X Taq MasterMixture（50x1ml）不含染料
2 X Taq MasterMixture（5x1ml）含染料
2 X Taq MasterMixture（20x1ml）含染料
2 X Taq MasterMixture（50x1ml）含染料
dNTP solution,10mM（4x250ul）
dNTP solution,25mM（4x250ul）
dATP solution,100mM（250ul）
dcTP solution,100mM（250ul）
dGTP solution,100mM（250ul）
dTTP solution,100mM（250ul）
Tissue Direct PCR Kit（20）
Tissue Direct PCR Kit（100）
Tissue Direct PCR Kit（500）
Blood Direct PCR Kit（20）
Blood Direct PCR Kit（100）
Blood Direct PCR Kit（500）
100bp DNA Ladder（50）
100bp DNA Ladder（200）
200bp DNA ladder（50）
200bp DNA Ladder（200）
1kbp DNA Ladder（50）
1kbp DNA Ladder（200）
HT Ladder I（50）
HT Ladder I（200）
HT Ladder II （50）
HT Ladder II （200）
CL5000 Ladder （50）
CL5000 Ladder （200）
EZ 96 Vacuum Manifolds
Vacuum Manifolds
E-Z 96 Magnetic Separation Device-A
E-Z 96 Magnetic Separation Device-B
Magnetic Separation Device-B
96 well 2ml collection plate(5)
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文献和实验使RNA的 3′－ OH末端与 5′ - 磷酸末端以磷酸二酯键而连结的酶。 EC 6． 5． 1． 3．是 J． Hurwitz等（ 1972）从感染 T4 噬菌体的大肠杆菌中提取的，与促进该噬菌体尾部纤维结合的基因 63的蛋白质为同一物质。作为其反应机理，首先是酶与 ATP形成酶 - AMP复合体，复合体的 AMP与 RNA的 5′ - 磷酸末端形成焦磷酸键，它与 RNA的 3′－ OH末端形成磷酸二酯键将 AMP游离出。一个 RNA链的 5′与 3′末端结合则生成一个环状分子。对基质
相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。 一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答 1、产品特性和使用方法 产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
