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Biotinylated SDS-PAGE Standards, high range, 250 μl
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Biotinylated standards provide accurate molecular weight determinations for blotting applications. Because biotinylation does not significantly increase the molecular weight of these proteins, they provide accurate molecular weight determinations for blotting systems.
The standards are detected by binding avidin-HRP or avidin-AP to the biotinylated proteins, followed by the appropriate color development reagent. The biotinylated standards are available in a high molecular weight range (45,000�200,000), low range (14,400�97,400), and broad range (6,500�200,000). See Electrophoresis Standards for a comparative analysis of Bio-Rad's standards for SDS-PAGE, IEF, and blotting.
Broad-range biotinylated standards. The biotinylated standards were detected with avidin-AP and NBT/BCIP color development reagents.
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文献和实验实验开始前,各试剂和样本均应平衡至室温;样本复融后需再次离心,取上清检测;试剂或样本配制时,需充分混匀并尽量避免起泡;标曲和样本建议做复孔检测。 加样:将标准品工作液依次加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔 100 μL。待测样品加入到其他孔,每孔 100 μL(若样本浓度高于检测范围,需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜,37℃ 孵育 90 分钟。提示:加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,避免产生气泡。加样时间宜控制在 10 分钟
倍:一步稀释。取 5μL 样本到 495μL 标准品 & 样本稀释液内,做 100 倍稀释; 稀释 1000 倍:两步稀释。取 5μL 样本到 95μL 标准品 & 样本稀释液内,做 20 倍稀释,再取 5μL 20 倍稀释样本到 245μL 标准品&样本稀释液内,做 50 倍稀释,总共稀释 1000 倍; 稀释100000倍:三步稀释。取 5μL 样本到 195 μL标准品&样本稀释液内,做 40 倍稀释,再取 5μL 40 倍稀释样本到245μL 标准品&样本稀释液内,做 50 倍稀释
实验开始前,各试剂和样本均应平衡至室温;样本复融后需再次离心,取上清检测;试剂或样本配制时,需充分混匀并尽量避免起泡;标曲和样本建议做复孔检测。 加样:将标准品工作液依次加入到前两列孔中,每个浓度的工作液并列加两孔,每孔50 μL。待测样品加入到其他孔,每孔50 μL(若样本浓度高于检测范围,需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。立即每孔加入配好的生物素化抗体工作液50 μL。混匀,给酶标板覆膜,37℃孵育45分钟。提示:加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,避免产生
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