2×Es Taq MasterMix(含染料)多少钱

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括2×Es Taq MasterMix(含染料)多少钱在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：2×Es Taq MasterMix(含染料)多少钱
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：1ml|5ml|25ml
编号：WE0104
  本品是由Es Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，超过98%的PCR扩增能一次成功，同时复杂模板也能得到有效扩增，并可最大限度地减少人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

产品组成：

 

组份	1ml	5ml	25ml
2×Es Taq MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml	5×5ml
ddH2O	1ml	5×1ml	5×5ml

注意：2×Es Taq MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase，3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Es Taq MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的2×Es Taq MasterMix(含染料)多少钱，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)
编号：WE0228
英文名称：NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
规格：24次|96次
  本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，省略了多个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。

试剂盒组成：

组份	24次	96次
10×End Repair Buffer	200μl	800μl
End Repair Enzyme Mix	48μl	192μl
Ligation and Nick Repair Buffer	400μl	2×800μl
T4 DNA Ligase	48μl	192μl
Bst DNA Polymerase	48μl	192μl
2×HiFidelity PCR Mix	600μl	2×1.2ml
10×Primer Mix(5μM each)	150μl	600μl

自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存，
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区域进行清洁。

DNA建库流程示意图：

起始材料：5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中，DNA纯度要求：OD260/OD 280=1.8-2.0。

DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。

试剂	体积
10×End Repair Buffer	6μl
End Repair Enzyme Mix	2μl
fragmented DNA	X(10ng～1μg)
RNase-Free Water	Up to 60μl

2、将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下：
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃

Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。

试剂	体积
Ligation and Nick Repair Buffer	10μl
T4 DNA Ligase	2μl
Bst DNA Polymerase	2μl
Adaptor A	7μl
Adaptor P1	7μl
RNase-Free Water	12μl
Total volume	40μl

注意：建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1，具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。

插入DNA 量/反应	不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度
	130 bp	260 bp	320 bp	410 bp
1μg	10μM	10μM	5μM	5μM
500ng	5μM	5μM	2.5μM	2.5μM
100ng	1μM	1μM	0.5μM	0.5μM

2、反应步骤：
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃

Adaptor连接DNA片段的选择性回收：
  构建不同大小的DNA文库时，需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案，直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒，可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入60μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠；
注意：不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟；
6、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清；
8、重复步骤7；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥；
10、将离心管从磁力架上取下，加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟；
11、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；

另一种方案：Adaptor连接DNA片段的全部回收：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。

PCR富集：
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀：

试剂	体积
连接adaptor后的DNA片段	20μl
2×HiFidelity PCR Mix	25μl
10×Primer Mix(5μM each)	5μl
总体积	50μl

2、PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30s
变性	98℃	10s	4～12个循环
退火	65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5min

注：样本量为1ug时，4-6个cycles，样本量100ng时6-8个cycles，样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。

PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟，短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中，DNA文库在-20℃保存。

储存条件：-20℃


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·蛋白印迹膜再生液
编号：WE0304
英文名称：Stripping Buffer
规格：100ml|500ml
  本产品采用温和洗涤配方，可在不影响目的蛋白的情况下，去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。

注意事项：建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白，如内参蛋白等。

操作步骤：
1、将曝光后的膜取出，加入适量的Stripping Buffer(蛋白印迹膜再生液)，再生液充分覆盖膜表面，8.5 cm×5.5 cm膜加入15ml左右蛋白印迹膜再生液，室温振摇孵育15分钟左右(孵育时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，使用蛋白印迹膜再生液时可以延长孵育时间至1小时或者在37℃孵育30分钟)。
2、弃去蛋白印迹膜再生液，用15ml缓冲液(PBST或TBST)洗膜3次，每次5 分钟，室温振摇。
3、为了检测酶标二抗洗脱是否完全，此时可以用显色方法来确定二抗是否洗脱掉。
4、待检测完毕，确认膜上无残留的酶活性，再生后的膜通过加入15ml的封闭液进行封闭，室温30分钟或者4℃封闭过夜。
5、重新加入待测一抗，进行下一轮的WB实验。

储存条件：室温

·蛋白酶K
编号：WE0212
英文名称：Proteinase K
规格：100mg
  蛋白酶K是一种以丝*酸为活性中心的枯草类蛋白酶，具有广泛的底物特异性，特别优先分解与疏水性*基酸、含硫*基酸、芳香族*基酸C末端邻接的酯键和肽键。可在多种不同盐、变性剂、去污剂、pH值和温度条件下进行分解蛋白作用。在提取DNA和RNA的缓冲液中具有很高的活性，主要用于DNA、RNA制备过程中蛋白的消化。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml的蛋白酶K 储存液使其溶解,溶解后的蛋白酶K 浓度为20mg/ml。
2、孵育温度为25℃～65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。
3、配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。-20℃长期保存。

储存条件：室温(15～30℃)


2×Es Taq MasterMix(含染料)多少钱关键词：WE0104,含染料,2×Es Taq MasterMix(含染料),2×Es Taq MasterMix(With Dye)

Taq plus酶 Tryptamine
PY01-068  牛胆粉  100克  
ARB13229 小鼠羟脯*酸(Hyp)定量分析 Mouse hydroxyproline,hyp ELISA KIT
ARB13908 猪血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)代做ELISA实验 Porcine vascuolar cell adhesion molecule 1,vcam-1 ELISA KIT
ARB12418 大鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)酶联免疫定量检测 Rat intercellular adhesion molecule 3,icam-3 ELISA KIT
E0617 抗凝裂解山羊血
E0606 脱纤维裂解驴血(无菌)
BTN130422 CM交换介质 CM Medium
BTN120690 红霉素溶液 Erythromycin Solution
CYB161012 兔IgG(液体-pH7.2PBS)
ARB12307 大鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)代做ELISA实验 Rat prolifeRating cell nuclear antigen antibody,pcna ELISA KIT
梭菌蛋白酶 Spermine tetrahydrochloride 9028-00-6
68157-60-8 *吡*脲 Forchior fennron(KT-30 cppu)
BL1121 柠檬酸*缓冲液0.1mol/L， pH4.5，无菌溶液

我公司强烈推荐核酸扩增(PCR)系列产品，热情期待您的咨询选购2×Es Taq MasterMix(含染料)多少钱。