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- 2025年07月07日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
12个月
- 库存：
100
- 供应商：
柯雷生物
- 规格：
50ug
宿主：E.coli
内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)
亚细胞定位n/a
片段与标签：N-terminal His Tag
缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性状：冻干粉
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文献和实验【转帖】教你一种简单、高效的提高重组蛋白质的诱导表达量的方法
。 实验步骤： 1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。 2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。 3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。 4.双酶切，插入到目标载体。 5.转化。 6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。 7.SDS-PAGE检测。 8.挑选高表达的多个克隆，测序。 怎么样？是不是很简单，不需要做太多的摸索
实验步骤 1. 制备包涵体 1) 取上述含目的蛋白菌液，4℃，6500 rpm 离心 15 min，弃上清； 2) 将沉淀完全重悬于 0.1 倍菌液体积的 1 × IB 洗涤液，反复混匀； 3) 在细胞裂解的过程中将重悬的溶液置于冰上以防止蛋白受热裂解，可选择超声波裂解或 French Press 法
范围，该例为0.1-1.0 mg/ml。这个浓度范围对于不同的细胞因子或重组蛋白是不同的。如重组人FGF-6(产品编号：100-30)为0.5-1.0mg/ml，而重组人Activin B(产品编号：120-15)则一定要是0.5mg/ml。 高于或低于该浓度范围会有什么问题呢？ 答：首先，细胞因子或蛋白会不稳定，即很容易出现活性下降的现象。其次，高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，即蛋白无法完全溶解。再者，高于或低于该浓度范围，蛋白可能会出现聚集(aggregation
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