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- HZbscience
- 中国/上海
- HZ120312-500
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase（TdT）
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
500 U盒
末端脱氧核苷转移酶产品及特点：
末端脱氧核柑转移酶 TdT是一种模板非依赖型DNA聚合酶，催化在寡核苷酸、单链和双链DNA的3’-OH重复添加脱氧核糖核苷酸。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时，TdT性能严格依赖于受体RNA 3’-末端的三级结构和核柑酸的种类。总的来说，TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。其反应示意图如下：
此产品特点是：
1. 通过Okayama-Berg 法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2. 线性双链DNA的各类3’-OH末端同聚物加尾。
3. 寡聚脱氧核苷酸和DNA标记
4. 5’-RACE（快速扩增cDNA末端）
5. 凋亡反应的原位定位。
末端脱氧核苷转移酶质量标准
无endodeoxyribonucleases，exodeoxyribonucleases，phosphatasesand ribonucleases污染。SDS-PAGE下呈单一带，纯度>99%。
活性单位定义
1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmo脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量。酶活性分析混合物：200mM二甲胂酸钾(pH7.2)，1mM CoCl2 ，0.01%（v/v）Triton×-100,10μM oligo（dT）10，1mM dTTP和0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
Buffer成分
储存Buffer:100mM醋酸钾（pH6.8），2mM 2-cay巯基乙醇，0.01%（v/v）Triton ×-100和50%（v/v）afi甘油。反应Buffer，5×：1M二甲胂酸钾，125mM Tris，0.05%（v/v）Triton X-100，5mM CoCl2（pH7.2，25℃）。
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文献和实验（一）原理 凋亡细胞是由于内源性核酸内切酶的激活后，将DNA 切割成许多双链DNA 片段以及高分子量DNA 单链断裂点（缺口），暴露出大量3- 羟基末端，如用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT ）将标记的dUTP 进行缺口末端标记，则可原位特异地显示出凋亡细胞。主要应用的是荧光标记法和酶标记法。 （二）荧光标记法 1 ．材料与试剂 采用德国Boehringer-Mannheim 公司In Situ Cell
原位末端转移酶标记技术 （ISEL）检测细胞凋亡 根据细胞凋亡时核酸内切酶被激活，将细胞核染色体DNA从核小体连接处切断，产生单股或双股DNA链。根据这一生化特性，将外源性核苷酸和酶（末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和DNA聚合酶I或Klenow大片段）渗入到凋亡细胞中，催化标记的外源性核苷酸与断裂的 DNA链相结合，并通过一定的显示系统显色。 由于凋亡细胞内的内源性核酸酶被激活后，将自身染色体或DNA切割，产生与DNA断裂数目相同
置于湿盒中）；同时设立对照： A）阴性对照：每一实验均应设立对照，每孔加50μl标记液（无末端转移酶）代替TUNEL反应混合物； B）阳性对照：每一实验均应设立对照，用微球核酸酶或DNA酶I处理已固定/透化的细胞（1μg～1mg/ml，室温10min），以诱导DNA链断裂。37℃孵育 30min； PBS洗3次； 单个转换和分析：标本吹干，加50μl转换POD（注意要在单层细胞上均匀分布POD，为避免蒸发，将玻片置于湿盒中）37℃ 30min，PBS洗3次，加50～100μl
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