SDS-PAGE标准品宽分子量范围,200μl

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）

  　　⑥1ml注射器及6号长针头　　⑦微量注射器（10μl或50μl）              　　⑧水泵或油泵　　⑨真空干燥器                            　　⑩培养皿（直径120mm） 2．试剂： （1）标准蛋白质 目前国内外均有厂商生产低分子量及高分子量标准蛋白质成套试剂盒，用于SDS-PAGE测定未知蛋白质分子量。 ①高分子量标准蛋白试剂盒（Pharmacia公司产品，表中16-1）。 表16-1  5种标准蛋白质 同时按说明书要求处理 ②

蛋白质免疫检测技术服务

至96孔板的标准品孔中，并用标准品稀释液补足20μl。 4、将待测样品滴加至样品孔中，用标准品稀释液补足20μl。 5、各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置30min。 6、测定A570 nm，绘制标准曲线图并计算蛋白浓度（蛋白浓度结果见excel表格）。 3、 蛋白浓度调整 4 、 WB实验 （1）  根据目的蛋白的分子量，配制12%胶，浓缩胶浓度为5%。 （2）  待检测蛋白样品上样量: 40ug/孔 （3）  电泳条件：浓缩胶恒压90V，约20min；分离胶恒压150V

电泳技术

酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。 ⒈材料与试剂  醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液，浓度在0.05～0.09mol/L。 ⒉操作要点 ⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。 ⑵加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白质的常规电泳分析，每cm加样线不超过1μl，相当于60～80μg的蛋白质。 ⑶