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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
EGY48
- 库存:
18
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
300ul/株
产品信息:
| 货号 | 名称 | 产品形式 | 规格 | 储存 |
| A0112 | EGY48 Strain | 甘油菌 | 300μl | -20℃ |
使用说明:
康朗质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后,请及时在固体平板上划线培养,挑取单菌落接种到液体培养基中,震荡培养后使用并保存甘油菌。如需获取其他详细信息请登录我司官网联系QQ客服查询。
基因型:
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
基本信息:
培养基:YPDA
菌株类别:酵母菌
培养条件:28℃,有氧,YPDA
质粒转化:电激
保存方式:30%甘油,-20℃
基本应用:用于酵母双杂交
备注:
菌株简介:
EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA 系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验;Transformation marker为: his3, trp1, ura3,报告基因为:LEU2;报告基因UAS(上游激活序列)来源于LexA op(x6),只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达 。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3,用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒pB42AD的筛选标志为TRP1,用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白;报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3,报告基因为LacZ,报告基因UAS来源于LexA op(x8) ,只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。EGY48菌株可用YPDA在28℃有氧的条件下培养,然后用30%甘油保藏菌种。
注意事项:
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。
2、使用甘油菌时可不完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可,也可完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,菌株的活力会逐渐下降。
菌种培养及打管说明:
1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。
3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
特别注意事项:
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时与我司销售联系或更换新的菌种。
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文献和实验去阳性克隆,保留阴性克隆。3. 酵母杂合试验(Yeast Mating)确定真阳性克隆 如下表所示,在酵母EGY48及其对应的YM4271宿主细胞中分别转入相应的质粒或文库DNA,通过杂合实验确筛选pLexA-靶DNA与pB42AD-文库确实具有相互作用的真阳性克隆。 质粒1 (in YM4271) 质粒2 (in EGY48) LacZ表型 Leu表型 pLexA pB42AD 白 不能生长 pLexA-靶DNA pB42AD 白 不能生长 pLexA pB42AD
酵母双杂交技术专题 LexA酵母双杂交系统简介 一、LexA酵母双杂交系统的设计原理 报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除,因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下,报告基因LacZ的转录活性为零,该基因的筛选标志为URA3,可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中,也可以被整合到EGY48基因组 DNA上。 质粒 pLexA的筛选标志为HIS3,在双杂交系统中用于表达DNA-BD(202个氨基酸残基
Two-hybrid analysis of genetic
bait plasmid and a URA3 lacZ reporter plasmid like pSH18-34.The strain expressing the activation domain-tagged protein (prey strain)is EGY48 (MATa ura3 his3 leu2::3LexAop-LEU2 trp1 LYS2)transformed with the TRP1 prey plasmid.Patches of these two strains
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