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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
SMD1168
- 库存:
20
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
500ul甘油菌
基本信息
| 出品公司: | ATCC |
|---|---|
| 菌株类型: | 毕赤酵母 |
| 培养基: | YPD培养基 |
| 生长条件: | 30 ℃, 有氧 |
| 基因型: | his4, pep4 |
| 表型: | His-, pep4-, Mut+ |
| 抗性: | 氨苄和卡那 |
| 质粒转化条件: | 电转 |
| 应用: | 蛋白表达 |
| 诱导方法: | 甲醇 |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| AT1033 | SMD1168 | 500ul甘油菌 |
¥1000.00 |
菌株特点
SMD1168是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细菌菌的污染和生长。
SMD1168毕赤酵母适宜的生长温度是28-30度,一般使用30度培养,温度超过32度可能导致细胞的死亡。
SMD1168毕赤酵母是His营养缺陷型菌株,在缺乏组氨酸SC minimal media中无法生长。
在制作SMD1168毕赤酵母甘油菌的时候,请不要使用4天以上的平板挑菌保存,尽量使用新鲜的平板。
SMD1168的配套载体是含有His4基因的酵母表达载体,例如pPIC9K, pPIC3.5K。
SMD1168基因组中的Pep4基因发生突变,造成蛋白水解酶A活性的丧失,可以保护表达产物免受降解,促进表达量的提高。
1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。
3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
特别注意事项:
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时与我司销售联系或更换新的菌种。
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文献和实验和Pichia 2个种属,共有30余种[8],其中尤以P.pastoris发展最快,研究最清楚。目前,用于外源基因表达的P.pastoris菌株为Invitrogen公司构建,主要有:Y11430,MG1003,GS115,KM71和SMD1168,其中Y11430为野生型,其余皆为组氨酸突变型,GS115有完整的aox1基因,在甲醇培养基上表型为Mut+,当用重组表达载体转化后,由于表达载体线化所用酶不同,其转化子表型可能是Mut+或Muts,可通过MD和MM培养基进行表型的鉴定;KM71的aox
降解现象的原因就在于此。改变培养基的PH值、加入适量的酵母提取物和蛋白胨或酪蛋白水解物,都能够提高外源蛋白的稳定性,而某些酶抑制剂如EDTA,虽然也能增加其稳定性,但却常会使一些原先并不明显的蛋白变得非常明显,影响其使用效果。 另外,使用蛋白酶缺陷株如SMD1163、SMD1165或SMD1168亦可避免产物降解的发生。虽然并不是每一种外源蛋白都会受内源性蛋白酶的影响,但在未知其有无降解可能的情况下可以考虑使用此种宿主菌。 在另外一种情况下,如果基因工程产物会影响宿主菌生长代谢
的还有SMD1168),每种酵母的特点有些不尽相同(Manual上写的很清楚),其中X-33由于是野生型,因此耐受性比较好,如果担心转化率的话可以考虑这种酵母菌,而GS115与X33一样都是属于MUT+表现型,也就是说可以在含甲醇的培养基中快速生长,但是据说会对外源基因表达有影响,KM71是MUT-型酵母,在甲醇培养基中生长缓慢,但是也有利于翻译后加工,比如形成二硫键,糖基化等等,另外SMD1168则是基因组中的Pep4基因发生突变,造成蛋白水解酶活性的丧失,可以保护表达产物免受降解,促进表达量的提高
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