PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞产品图

PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞

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  • 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞
  • 中国武汉
  • 2026年06月07日
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    • 服务名称:

      磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞

    • 提供商:

      PriCells

    • 规格:

      0.5 ML

    PriCells : 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞
    基本方案
    用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4 +细胞或CD8 +T细胞的自动分离
    实验材料
    1、小鼠
    2、HBSS洗涤缓冲液
    3、MACS缓冲液
    4、磁珠
    5、RPMI-10完全培养基
    6、AUTOMACS系统和分选柱
    7、30μm尼龙网或40μm预分离滤膜
    实验方法
    1、用5只小鼠的淋巴结或2只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。
    2、细胞在10mlHBSS洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数。
    3、细胞悬液在4℃,200g离心10min。弃上清后将沉淀按每10 8个细胞0.9ml MACS缓冲液的比例混悬。每10 8个细胞加入0.1ml适当的磁珠后在4℃孵育15min。
    4、在孵育的时间里,打开AUTOMACS系统电源。按产品说明书中操作规程运行清洁程序。
    5、细胞悬液在4℃,200g离心10min。弃上清,在沉淀中加入足量的MACS缓冲液使细胞浓度达到10 8个细胞/ml,充分混悬。将细胞通过30μm尼龙网或40μm预分离滤膜。用0.1~0.4mlMACS缓冲液冲洗滤网。
    6、细胞放到AUTOMACS的上样通道。选择possel程序,这样标记的细胞将从阳性通道洗脱。
    7、细胞悬液在4℃,200g离心10min。弃上清后将沉淀用2~5ml RPMI-10完全培养基混悬。计数。
    附录:
    RPMI完全培养基:
    RPMI1640培养基含有:
    2%、5%、10%、15%或20%FBS,56℃热灭活1h
    2μmmol/L L-谷氨酰胺
    50μmol/ml 2-ME
    100U/ml 青霉素
    100μg/ml 硫酸链霉素
    RPMI-10完全培养基:
    配制RPMI完全培养基加入:
    10%(V/V)FBS
    1mmol/L bing酮酸钠
    50μg/ml庆大霉素
    10mmol/L HEPES
    4℃可保存2周
    过滤除菌
    HBSS洗涤缓冲液:
    HBSS,含有:
    5%(V/V)FBS
    20mmol/L HEPES,pH7.0
    100U/ml 青霉素
    100μg/ml 链霉素
    4℃可保存1个月
    MACS缓冲液:
    PBS,pH7.2
    0.5%(m/V)BSA
    2mmol/L EDTA
    过滤除菌
    用于自动MACS系统,室温储存1个月
    用于LS或LD柱时,脱气,4℃保存






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