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- 2025年11月22日
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深圳市拓普生物科技有限公司
- 服务名称：
小鼠淋巴细胞分离服务
一、实验仪器：超净工作台、水平离心机、电动移液枪、200目钢筛网、5mL注射器，剪刀、镊子等器械及10cm培养皿、10mL血清移液管等耗材
二、实验试剂：Hank’s液、Ficoll淋巴细胞分离液、RPMI 1640 培养基、胎牛血清、红细胞裂解液、双抗
三、实验步骤：
⑴颈椎脱臼处死小鼠，分离脾脏，将脾脏浸没至含1%双抗4℃预冷Hank’s液50mL离心管中；
⑵在超净台上，将脾脏从离心管中取出，放置在含1%双抗Hank’s液中10cm细胞培养皿中，用剪刀去除脾脏上的附带组织；
⑶用剪刀将脾脏剪碎放置200目的无菌筛网上，筛网置于10cm培养皿之上，用5mL注射器的活塞将脾脏研磨通过筛网，并用Hank’s液不断冲洗；
⑷收集细胞悬液置于冰上，并用3倍悬液体积的红细胞裂解液裂解红细胞，在冰上轻轻吹打，静置10min;
⑸水平离心机中，1500r/min离心10min，去上清，加Hank’s重悬细胞；
⑹取2mL细胞悬液混匀，用滴管沿盛有2mL Ficoll淋巴细胞分离液的15mL离心管中将细胞悬液沿管壁轻铺于分离液面上（总体积不超过离心管2/3均可）；
⑺将离心管置于水平李新忠1500r/min离心10min，可以看到细胞分层；
⑻用电动移液枪将移液管小心插入白色絮状（云雾层浑浊状）细胞层中吸出细胞至另一离心管中；
⑼继续加入Hank’s液混匀细胞，1500r/min离心5min，去上清；
⑽用含10%FBS的RPMI 1640培养基重悬即得到单个核细胞（MC）。
说明：分离得到的是含有单核细胞和淋巴细胞的单个核细胞群体，如果需要针对性研究单独淋巴细胞群体，可采用淋巴细胞磁珠分选等方法对细胞再次进行分选。（下有实验附图）
二、实验试剂：Hank’s液、Ficoll淋巴细胞分离液、RPMI 1640 培养基、胎牛血清、红细胞裂解液、双抗
三、实验步骤：
⑴颈椎脱臼处死小鼠，分离脾脏，将脾脏浸没至含1%双抗4℃预冷Hank’s液50mL离心管中；
⑵在超净台上，将脾脏从离心管中取出，放置在含1%双抗Hank’s液中10cm细胞培养皿中，用剪刀去除脾脏上的附带组织；
⑶用剪刀将脾脏剪碎放置200目的无菌筛网上，筛网置于10cm培养皿之上，用5mL注射器的活塞将脾脏研磨通过筛网，并用Hank’s液不断冲洗；
⑷收集细胞悬液置于冰上，并用3倍悬液体积的红细胞裂解液裂解红细胞，在冰上轻轻吹打，静置10min;
⑸水平离心机中，1500r/min离心10min，去上清，加Hank’s重悬细胞；
⑹取2mL细胞悬液混匀，用滴管沿盛有2mL Ficoll淋巴细胞分离液的15mL离心管中将细胞悬液沿管壁轻铺于分离液面上（总体积不超过离心管2/3均可）；
⑺将离心管置于水平李新忠1500r/min离心10min，可以看到细胞分层；
⑻用电动移液枪将移液管小心插入白色絮状（云雾层浑浊状）细胞层中吸出细胞至另一离心管中；
⑼继续加入Hank’s液混匀细胞，1500r/min离心5min，去上清；
⑽用含10%FBS的RPMI 1640培养基重悬即得到单个核细胞（MC）。
说明：分离得到的是含有单核细胞和淋巴细胞的单个核细胞群体，如果需要针对性研究单独淋巴细胞群体，可采用淋巴细胞磁珠分选等方法对细胞再次进行分选。（下有实验附图）
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