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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
室温
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Yeast high purity plasmid small amount rapid extraction kit
- 库存:
692
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售北京高纯度酵母质粒提取试剂盒品牌,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京高纯度酵母质粒提取试剂盒品牌
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:Yeast high purity plasmid small amount rapid extraction kit
本试剂盒适用于酵母小规模高纯度质粒制备。采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合lyticase特异消化酵母细胞壁,能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除, 最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(50次):
RNaseA(10mg/ml)—————————150μl
Lyticase————————————2500U
溶液YP1—————————————15ml
溶液YP2—————————————15ml
溶液YP3—————————————20ml
去蛋白液PD———————————25ml
漂洗液WB————————————15ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
吸附柱和收集管(2ml)———————50套
试剂盒特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯*(代"仿")等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶液YP3和去蛋白液PD中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 通常酵母质粒拷贝数都很低,高拷贝质粒最大得率一般为每5 ml 培养物提取1μg左右的质粒。用于下游试验时通常建议使用量为:1-5μl用做PCR 模板;5-10μl 用于转化大肠杆菌,选择高效率的感受态细胞。
4. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成, 与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
5. 用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇, 0.1M Na2EDTA,14 mMβ-巯基乙醇)。配制方法:在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇,加入200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ,不需要调节PH 值,定容到1L,4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。
6. 菌体浓度检测一般OD600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml,由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大,以上仅供参考。
7. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
储存条件:室温,有效期12个月。
本品别名:酵母质粒小量提取试剂盒|高纯度酵母质粒提取试剂盒|高纯度酵母质粒制备试剂盒|
酵母质粒小量提取试剂盒|酵母质粒小量制备试剂盒
北京高纯度酵母质粒提取试剂盒品牌正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·真菌基因组DNA提取试剂盒
编号:ALH167
英文名称:Rapid extraction kit for fungal genomic DNA
规格:50次|100次|200次
本试剂盒适用于快速提取真菌组织细胞基因组DNA。采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯*(代"仿")等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的真菌组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(100次):
RNaseA(10mg/ml)——————500μl
缓冲液AP1—————————50ml
缓冲液AP2—————————20ml
缓冲液AP3/E————————25ml
漂洗液WB —————————25ml
洗脱缓冲液EB ———————20ml
吸附柱AC —————————100个
收集管(2ml)————————100个
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3. 快速,简捷,单个样品操作一般可在1 小时内完成。
4. 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度, OD260/OD280 典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot 和各种酶切反应。
储存条件:室温,有效期12个月。
北京高纯度酵母质粒提取试剂盒品牌关键词:
酵母质粒小量提取试剂盒,高纯度酵母质粒提取试剂盒,高纯度酵母质粒制备试剂盒
·酵母基因组DNA大量提取试剂盒
编号:ALH156
英文名称:Yeast DNA Massive Extraction Kit
规格:10次
本试剂盒用于快速的从酵母中大量提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下, 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
试剂盒组份:
酵母裂解液——————100ml×2
蛋白沉淀液——————70ml
DNA溶解液 ——————30ml
产品特点:
1.不需要使用有毒的苯酚、氯*(代"仿")等试剂。
2.快速,简捷,整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定,产量高(比离心柱型的产量高一倍以上),OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达50Kb-150kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。
操作步骤:
1. 吸取60ml-70ml 酵母培养物到一个100ml 离心管;2,500 x g 离心2 分钟,尽可能弃上清,必要时候可以用枪吸去。
2. 高速涡旋振荡,打散重悬酵母细胞团。
3. 加入20 ml 酵母裂解液,涡旋振荡混匀,或者用1 毫升的枪头反复吹打混匀。酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要,必须充分分散重悬。
4. 将裂解物放置在70℃水浴15-30 分钟。
如果产量低,可以适当提高水浴温度和延长水浴时间,中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。
5. 冰上至少5 分钟使回复到室温。
6. 在回复到室温的裂解物内加入6.8 ml 蛋白沉淀液后,在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25 秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5 分钟。
7. 2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5 分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀,也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
8. 小心缓慢吸取上清到一个新的100ml 离心管中,不要吸到沉淀。吸取上清时,注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中,可再次离心2 分钟后取上清。
9. 加入等体积的室温异丙醇,颠倒30 次混匀或者直到出现絮状DNA 沉淀(或者白色浑浊沉淀)。
10. 2,500 x g 离心5 分钟(可根据需要调整加大离心力),在管底可以见到白色的DNA沉淀块,倒弃上清。
11. 加入20ml 70%乙醇,颠倒几次漂洗DNA 沉淀,2,500 x g 离心2 分钟, 倒去上清(注意不要把DNA 沉淀倒掉了),倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇,还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇,空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头,否则DNA极其难溶;也不能残留太多乙醇,否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
12. 加入1-3ml DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀,轻弹管壁混匀,可以放置在65℃温育30-60 分钟(不要超过一小时),也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。
13. 加入0.5-1ml RNase A(10mg/ml),颠倒混匀,37℃温育30-60 分钟去除残留RNA。该步骤主要作用为去除残留的RNA,如果残留RNA多,可以适当延长时间或者增加RNase A 用量。如果残留RNA 不影响实验,可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验,也可以用等体积酚/氯*(代"仿")抽提去除,然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。
14. DNA 可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
储存条件:室温,有效期12个月。
北京高纯度酵母质粒提取试剂盒品牌关键词:
酵母质粒小量提取试剂盒,高纯度酵母质粒提取试剂盒,高纯度酵母质粒制备试剂盒
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