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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
Pfu DNA Polymerase
- 库存:
291
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
200U|1000U
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销售Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)哪里卖
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:200U|1000U
英文名:Pfu DNA Polymerase
编号:YT372
pfu DNA 聚合酶简称Pfu酶,是最常用的高保真DNA聚合酶之一。Pfu DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量为90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同,Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外,Pfu酶有5’至3’外切酶活性,但Pfu酶没有反转录酶活性。
由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性,因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低,出错率为2.6×10e-6。Pfu的出错率不仅远远低于Taq酶,也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等,因此Pfu酶常作为首选的高性价比的高保真DNA聚合酶。
来源:本Pfu DNA Polymerase为recombinant Pfu DNA Polymerase,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性质相同。
用途:高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、双平端PCR克隆等。
1)Pfu酶扩增出来的DNA*(代"片")断为双平端,可以用于双平端克隆,但不能用于常规的T载体克隆。
2)dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介导的PCR扩增反应。
活性定义:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
10×Pfu Buffer (with Mg2+):200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl,1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
失活或抑制:酚氯*(代"仿")抽提可以使Pfu酶失活。
储存条件:-20℃。
注意事项:
1)由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用Pfu酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2)Pfu DNA polymerase在扩增DNA*(代"片")断时的出错率非常低,但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况,例如RT-PCR进行定量或半定量,推荐使用Taq DNA polymerase。在扩增效率和出错率需要兼顾的情况,可以选择YTTaq DNA polymerase。在扩增2kb以下DNA*(代"片")断时,Pfu酶和Taq酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下,须选择Pfu酶。
3)Pfu酶有3’至5’的外切酶活性,在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu酶一定要最后加入,并且要在冰浴上操作。
4)不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。
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·IkB-α抗体
编号:YT806
英文名称:anti-IkB-α antibody
规格:>10次
本抗体是用人工合成的人IκB-α的一段多肽进行适当修饰后免疫rabbit,然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度抗体。本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测10次。
本IκB-α抗体识别的是总IκB-α(total IκB-α),无论IκB-α被磷酸化与否都可以被检测出来。
IκB-α是调控NF-κB的一个关键蛋白。NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物。当炎症因子、生长因子或趋化因子等(例如TNF-α,IL-1β等)可以激活NF-κB的刺激存在的情况下,IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化,随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NFκB和IκB-α解聚后,其核定位序列被暴露,从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。因此,通过Western检测IκB-α是否显著降解就成为检测NF-κB是否激活的一个重要指标。
产品组份:
IκB-α抗体————10μl
Western一抗稀释液————10ml
抗体参数:
免疫原物种:人
免疫原:人工合成的人IκB-α的一段多肽
宿主:兔
用途:WB,IP,IHC,IC
交叉反应性:人,小鼠,大鼠
IκB-α分子量:~36-39kD
推荐稀释比例:WB(1:1000),IP(1:250),IHC(1:100),IC(1:100)
注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体,Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜,如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验请教:高保真酶 关于taq plus 求教Pfu酶作PCR的要求 Pfu扩增求救!!!! 请问哪一种高保真DNA聚合酶比较好呢? Pfu DNA 聚合酶的问题 pfu的扩增条件! 关于高保真酶问题? 求助:高保真酶 关于高保真酶 关于高保真的酶 pfu高保真酶怎么那么难用? Pfu DNA聚合酶------常见问题 请教如何做病毒的 pfu 请教Pfu扩增2kb片段 高保真酶咋还不如普通的Taq酶? 请教关于高保真酶问题 哪个公司
聚合酶 从Thermus thermophilus HB8中提取而得,改酶在高温和MnCl2条件下,能有效地逆转录RNA;当加入Mg2+后,该酶的聚合活性大大增加,从而使cDNA合成与扩增可用一种酶催化。 二、高保真DNA聚合酶 pfu DNA 聚合酶 是从Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高温DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正PCR扩增过程中
Polymerase,Pfu)是从高温嗜热菌Pyrococcus furiosis分离出的高保真(High Fidelity)耐高温DNA聚合酶。Pfu酶能纠正DNA扩增(PCR)过程中产生的错误,而传统的Taq DNA 聚合酶(Taq DNA Polymerase,Taq),Tth DNA聚合酶及它们的变体如AmpliTaq,KlenTaq等都不能。高温DNA聚合酶Vent、DeepVent、Tli、Pwo、Pfu、UlTma等都具有校正功能(Proof reading),但Pfu酶是迄今发现的所有高温DNA聚合酶
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