- ¥1050
- TBD
- 天津
- LZS1083P
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 保质期：
12个月
- 库存：
大量供应
- 供应商：
上海研谨生物科技
- 规格：
200ml/KIT
本品用于分离骆驼组织中性粒细胞
技术文档编号：TBD0035SOP
【产品规格】
200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
| 名称 | 产品编号 | 规格 | |
| A | 分离液 1 | 200ml | |
| B | 试剂 F（赠品） | F2013TBD | 200ml |
| C | 样本稀释液（赠品） | 2010C1119 | 200ml |
| D | 清洗液（赠品） | 2010X1118 | 200ml |
| E | 红细胞裂解液（赠品） | NH4CL2009 | 100ml |
| F | 说明书 | 1 份 | |
【实验前准备】
适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
- 首先制备组织单细胞悬液，制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。
- 取一支 15ml 离心管，依次加入分离液 1。
- 用吸管小心吸取细胞悬液样本加于分离液之液面上，400-650g ，离心 20-30min（注：如改变样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
- 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。
- 用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）将红细胞裂解（具体方法见“红细胞裂解液使用说明”）即得目的细胞。
- 将获得的细胞层移至另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：
2010X1118），混匀细胞。
- 250g，离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 250g，离心 10min。
- 重复 8、9、10，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
分离图例
【注意事项】
- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，需在取样 2h 内进行实验。
- 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
- 分离液用量大于组织单细胞悬液样本量时，分离效果更佳。
- 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助.
【储存条件及有效期】
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验中性粒细胞提取率大于 80%。
| 下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。 | ||||||||
| 红细胞 | 白细胞 | 血小板 | ||||||
| （4.0-10.0）×109 | ||||||||
| 含量（个/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | （1.0-3.0）×1011 | |||
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | ||||||
| 【相关实验技术方案】 | ||||||||
- 组织单细胞悬液制备技术。
- 所获得中性粒细胞的培养技术。
- 所获得中性粒细胞的核酸提取技术。
- 所获得中性粒细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术
D.PCR 技术
【可能存在的问题及解决方法】
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
| 出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
| 离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 |
| 离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | |
| 离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 |
| 离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 | |
- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
- 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
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文献和实验试验。 3 注意事项 1） 血液新鲜程度是影响分离效果的关键因素，请尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离。 2） 为保证细胞的活力，整个操作过程请轻柔，避免对细胞造成机械性的损伤。 3） 为保持细胞状态良好，请尽量缩短整个试验的周期。 4 动员外周血单个核细胞分离试剂盒 IPHASE/汇智和源针对动员外周血单个核细胞分离的特点，开发了对应的单个核细胞分离试剂盒。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分，各成分对细胞无毒性，不会影响细胞的原始状态
IPHASE/汇智和源针对人脐带血单个核细胞分离的特点，开发了人脐带血单个核细胞分离试剂盒。该试剂盒包含单个核细胞分离液和洗涤液两个组分，各成分对细胞无毒性，不会影响细胞的原始状态；同时，该试剂盒操作简单便捷，可大大缩短细胞分离时间，分离所得细胞纯度高、状态好、得率高。 关 于 我 们 汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。
内腔可产生高强度的磁场，足以分离磁微粒标记的细胞，无需分离柱提供提供更高强度的磁场。由于磁微粒极小，不会影响靶细胞的流式分析结果，因此不需要去除。除了现有的定型产品外，客户可选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合，来富集任何所需的细胞。如果您有自己的小鼠IgG1抗任何细胞的抗体, 也可以使用“Do-It-Yourself”试剂盒做成TAC，用来分选您想要的细胞。此外，还可以根据您的特殊需要，专门为您设计定做试剂盒。用于正选小鼠的细胞
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