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- 2025年09月28日
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赫澎（上海）生物
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
连接酶，反应10分钟。平滑末端连接：在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时，或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。 另外，NEB的快速连接试剂盒 (Quick Ligation Kit, NEB #M2200V [15个反应])是独有的可以在室温5分钟条件下连接平滑末端和粘性末端的试剂盒。 图1：在25°C条件下，用1 unit（1:400稀释后取1 µl）T4 DNA连接酶连接λDNA/Hind Ⅲ片段(4-碱基粘端)不同反应时间的结果。 图
相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
相关专题 重组DNA技术工具酶 连接酶旧称“合成酶”。DNA连接 酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 DNA连接 酶
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