Protein A 琼脂糖凝胶

【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。

[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然

RT-PCR 原理与实验技术

一、知识背景 1. 基因表达：DNA——RNA——Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因——104 个丝心蛋白 mRNA（每个 mRNA 存活 4 d，可以合成 105 个丝心蛋白）——共合成 109 个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的 mRNA 表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2. PCR 技术（Polymerase chain reaction）： 即聚合酶链式反应。在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于 DNA 聚合酶的酶促反应，其特异

仅扩增全长cDNA末端的高级RACE方法

特异性的引物PCR扩增。基因经过30-35个循环的一轮PCR扩增。50μl PCR扩增产物中的15μl在1.2％E-Gel®琼脂糖凝胶电泳检测，在紫外光下观察。 泳道1：HPRT（次黄嘌呤磷酸核糖转移酶），1.3kb，30拷贝/细胞 泳道2：SMAP（胸腺激素受体共激活蛋白），3.1kb 泳道3：Cleavage and polyadenylation specificity factor，4.5kb 泳道4：TFRC（转铁蛋白受体），5.0kb 泳道5：IGFⅡR（类胰岛素生长因子Ⅱ受体