凝胶抽提离心柱，25个

重组质粒的抽提、鉴定与凝胶成像技术

了β-半乳糖苷酶活性,在x-gal 和ITPG存在的生色诱导培养基上只能形成白色菌落。所以在含x-gal 和ITPG 的选择性培养基上长出的白色菌落，初步可以认为是重组转化子。为了防止假阳性的出现，需要通过重组子质粒的抽提，经EcoR I和HindIII 双酶切，凝胶电泳进一步鉴定，看是否酶切为原来的载体pUC18 质粒和PCR产物的分子量图谱。如果是，则认为新构建的质粒已重组成功。当然最好的鉴定方法是通过测序来确认。三、材料、试剂与器材1.高速离心机、微量移液器、1.5ml EP管2.Rapid

土壤微生物DNA提纯方法及纯度检测

/min离心1 min，倒空离心管再重复离心一次脱干PVPP。将离心柱放在新的1.5 mL离心管上。将100 μL粗DNA在PVPP离心柱上，10 000 r/min离心1 min；    (2) Sephadex离心柱：Sephadex G-200树脂用TE缓冲液(pH 7.6)在4℃平衡过夜，将细碎的颗粒去除。在1 mL离心柱上加入500 μL平衡后的Sephadex G-200凝胶，3 000 r/min离心直至凝胶体积不再变化。加入100 μL粗体DNA样

结果分析篇

1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带，这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋，线性，开环等多种不同的形态，所以在电泳时常看到三条不同大小的条带，而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态，可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态；右图为质粒电泳图   2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关，比如： ①在加入裂解缓冲液后，剧烈震荡导致大肠杆菌基因