小鼠抗体同型检测微孔板

流式课堂 | 流式对照设置之同型对照

蛋白分子 以 CD45＋白细胞样本为例，在排除了死细胞和粘连体后，未进行染色、也未进行 Fc 受体阻断的空白样本，各通道荧光处于低水平。如图所示： 染同型对照后，背景荧光增强。 针对这种因 FcR 导致的强背景，建议可以添加 FcR 封闭剂，如下图所示： 阻断 FcR 后，染同型对照，背景荧光恢复到与空白相似。 #03 什么时候需要做同型对照？ （1）对于阴阳性分群明显的指标，不需要同型对照即可设门，例如 CD3、CD4、CD8 等用于 T 细胞的检测指标。对于阴阳性分群不清楚的指标，例如 CD25、CD

如何选择合适的流式抗体

流式抗体的选择和配色原则由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。本文介绍如何选择合适的流式抗体： 1、需要满足抗体选择的最基本条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验等。 靶标特异性：确定标记物名称，确定是细胞表面表达，还是细胞内表达。细胞内表达需要进行透膜。 物种来源：确定待测样本的种属来源。例如，抗小鼠的抗体，不能用于人的样本的检测

史上最易懂的流式细胞实验设计指南

细胞术也是一种免疫学实验，下面我们继续来设置对照。空白对照在流式上机检测前，我们还需准备额外一组细胞（正常或处理过的皆可），什么染料也不加，作为空白对照。为什么要设置空白对照呢？除了阳性荧光信号之外，我们还需要排除样本是否自带荧光背景，所以要用空白对照来验证在各个检测通道上的信号是否都是阴性。同型对照（Isotype control）这个对照很多同学都比较陌生。这个还得从抗体结构说起。大家知道抗体是个 Y 字形的，Fab 区域是特异性识别抗原的。在做蛋白免疫印迹时，只需考虑 Fab 的特异