iScript 反转录超混液，100x20ul

基因表达之RT-PCR之我见

，可否？关于原位杂交和dot blot大家可以和我论战的，我曾经看到一篇公开发表的文章（还有sci分呢，嘿嘿）把dot blot称为定量检测，是极端错误的（偶很少用这样的字眼）。1、模板均一性问题：愚见采用从RNA定量的方法似不妥，不要说PCR的本身的敏感度，即便是在反转录就有差异，到了cDNA的分装和用于模板的取样，这些都不能保证准确，当然在反转录阶段我们也经常控制在1或5ug，但这是为了再将来加样的时候保证大致差不多，而且尽可能地利用反转录酶，而且RNA定量本身即使用电泳也不是那么准，更不要

cDNA Synthesis

of mRNA) or random hexamers; the kit used here contains both kinds); nucleotides for DNA synthesis (dNTPs); MgC2 and buffers required by the enzyme, which are all present in the 5x Reaction Mix.   Materials * iScript cDNA Synthesis Kit (BIORAD

碱变性法、煮沸法、碘化钠法提取制备模板核酸

碱变性法 取血清20ul，加入1mol/L NaOH 20ul，37℃30min，离心，加 1mol/L HCl 20ul，离心后，取上清5ul，用于PCR扩增.*亦有用10ul血清加NaOH至 0.2mol/L，37℃1h，再加HCL中和离心后取上清10ul做PCR，其特异性和敏感性较前法 更好. 煮沸法 经离心洗涤过的组织细胞，分泌物及血液标本，加适量无菌蒸馏水或PBS，混匀 后，100℃煮沸10～15min，14000r/min 10min，取上清做