iScript 反转录超混液，25x20ul

利用实时定量PCR分析基因相对表达量

量的样品的时候，这一方法的优势就格外明显。当然我们也可以利用PCR 实验以外的方法来完成这种校正。最常用的一种方法就是用紫外吸收来确定用于cDNA 合成的RNA 量，然後将相同的RNA 反转录产生的cDNA 用于PCR 定量反应。这种外标法校正的一个应用例子就是研究某种实验处理是否影响内标基因的表达。在这里，目标基因和内标合二为一。在这个例子中，公式[2] 不被公式[3] 除，公式[5 ]变成： 整理得： 任一样品X0,q 除以参照品X0,cb 得： 在这里△ C'T=CT,q-CT

基因表达之RT-PCR之我见

好，（唉，真知灼见都说出来了，（已经没有什么吐的啦吧））很多人会问，过了一个循环不久一样了么？不一样的，这和PCR本身的原理有关，什么原理我也不懂。就像到了线性期，很多人会说，再加酶，实际上不是的，再加酶和dNTP还有引物都没用的，其实这些本身就是过量的。 综合上面两点，说说下面一点：一般摸出来的结果是什么呢？个人认为，再使用1ugRNA反转录后用2－4ul为模板和使用5ug反转录用1－2ul为模板的情况下，一般目的基因很少超过30循环，著名的β－actin很少超过25循环，如果你看到有人用actin

cDNA Synthesis

Cat. No. 170-8891)             - 5x iScript Reaction Mix             - Nuclease-free water             - iScript Reverse Transcriptase (RT) * Waterbaths:            - 25° C                         - 42° C