胶体金总蛋白染色剂

免疫金标记技术在体外诊断领域的应用

结合物，研究人员通常制备小批量的多达60批次的不 同胶体金结合物。每批次胶体金结合物在某一关键制备步骤上都与其它不同，各批次都被测 试从而确定哪种标记技术对于最终的检测分析可能获得最佳的反应结果。 这类调试应该包括所有可以改善胶体金结合物的灵敏度、交叉反应以及潜在稳定性的技 术参数。典型的测试应包含但不应仅限于抗体工作缓冲液、防腐剂的类型、盐度、表面活性 剂含量、胶体金颗粒的尺寸、封闭剂的类型、总蛋白浓度、结合物工作缓冲液以及结合物的 浓度。为了确定不同封闭剂的效果，建议考虑以下调试内容

胶体金标记蛋白A技术

为胶体金结合作准备。 具体操作: 一、包埋：常规电镜制样，样品只需要戊二醛固定，不需要锇酸后固定。丙酮梯度脱水时70％的丙酮中没有添加染色剂。样品于37度烘箱中固化。 二、切片： 超薄切片厚50～70nm左右，载于300网孔的镍网上。 三、抗原修复： 1、置1%H2O2内10min至1h（视树脂的硬度和切片的厚度而定），以去锇酸和增进树脂穿透性，有利抗体进入。如切片很薄或于低温包埋时，此步可省略。操作时，滴入1%H2O2液1滴于蜡板上，将网的载片面轻浮于液滴上。对中枢

胶体金标记蛋白A技术攻略

液以及胶体金稀释液：1%卵白蛋白—0.02mo1/LTris缓冲液(pH8.2)，后封闭为胶体金结合作准备。 二、具体操作: (一)包埋： 常规电镜制样，样品只需要戊二醛固定，不需要锇酸后固定。丙酮梯度脱水时70%的丙酮中没有添加染色剂。样品于37度烘箱中固化。 (二)切片： 超薄切片厚50～70nm左右，载于300网孔的镍网上。 (三)抗原 修复： 1、置1%H2O2内10min至1h(视树脂的硬度和切片的厚度而定