一次性胶块制备模具

垂直电泳槽的使用

的考马斯亮蓝 R-250（Bio-Rad）溶于水/甲醇/乙酸（比例: 45:45:10）混合液中） •脱色缓冲液（水/甲醇/乙酸（比例:45:45:10）） •配有紫外/白光转换板的Dolphin Doc凝胶成像系统（Wealtec) 步骤 灌胶并将胶块置入电极中： •灌胶之前，用75％的乙醇擦试玻璃板和胶条。向上抬起翼型扳手打开灌胶模具，并将模块水平放置到台面。将玻璃板和胶条按顺序放入V-GES灌胶模具中（图 2）。 •记得将校正卡恰当地插入厚玻璃板与U形玻璃板之间的空隙

蛋白质电泳槽 Western Blot 垂直电泳制胶器漏胶问题分析

重新制胶。用市面比较常见的制胶模具设计举例，在下图中可以看到，玻璃板中间盛装凝胶溶液，玻璃板两侧靠夹子夹紧玻璃板和边条压片，下方用一个较厚的橡胶垫做密封，这样就组成了一个单侧上开口的三明治夹形状。如果密封的好，凝胶溶液就会凝固成与边条压片厚度一致的凝胶用来做后续的蛋白质电泳。 那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢？1. 玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损，这样玻璃板受损处则不再平整，液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板，而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的，这种情况则需要一起

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2.5%三氟乙酸/50%乙腈，30℃ 1小时，吸出液体与前一次的提取液合并，抽真空离心干燥。抽干的样品可于4℃放置一个月，也可用2μl 0.5%三氟乙酸充分溶解肽段立即进行质谱鉴定。 3 讨论 3.1 切胶、脱色 传统的从双向电泳凝胶切取蛋白质点的方法是使用刀片，先切取胶块再切碎。操作刀片费时费力又很难做到精确，胶块的大小难于掌握，特别是在蛋白质点密集处几乎无法下手，而且如果刀片清洗不彻底容易造成污染。使用一次性的吸头则不存在这些问题。吸头是锥形的，通过在不同位置修剪可以随意调整孔径大小；用吸头