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- 2025年07月11日
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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验1. 溶液准备：转印缓冲液：0.025M Tris base , 0.192 M甘氨酸 , 30%甲醇10×TBST:250mM Tris-HCl （ pH 8.0 ） , 1.25M NaCl , 0.5%Tween20封闭液：1×TBST , 3%脱脂奶粉洗涤液：1×TBST2. 实验程序：A. 膜的准备：将PVDF膜切成条浸在甲醇中，室温条件下在摇床上摇1min,去除甲醇后加入1×TBST备用。B. 膜转印：1. 细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳2. 用夹心法电转至PVDF膜
-PAGE电泳 2. 用夹心法电转至PVDF膜 3. 海绵和滤纸浸泡在转印缓冲液预湿润 4. 在半干转印系统中10v转印2h，封闭液室温封闭1h或者4℃过夜。 C. 抗体检测： 1. 将一抗溶解于3ml封闭液中，终浓度为4μg/ml，4℃孵育过夜。 2. 用洗涤液洗涤3次，每次5min。 3. 用封闭液来稀释二抗（HRP标记的抗兔或抗鼠），室温下培育1h。 4. 用洗涤液洗涤3次，每次5min。 5. 用化学发光底物检测。
Western Blotting 膜法学堂：选择正确的转印膜，优化
PVDF膜与硝酸纤维素膜的比较： PVDF膜的材质是由 Millipore 公司在1985年首创并应用于蛋白转印。由于PVDF膜与硝酸纤维素膜相比有许多突出的优点，包括更好的蛋白质保留率、更高的机械强度和更广的化学相容性(Pluskal, et al., 1986)，因此被广泛使用于免疫检测实验当中。其中更高的机械强度和更优的化学相容性使PVDF膜成为免疫检测中染色和二次免疫检测时的理想选择
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