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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验Western Blotting 膜法学堂:选择正确的转印膜,优化
有另外一种情况也是需要选择特殊型号的转印膜,那就是荧光检测的Western Blotting实验。普通型号的Immobilon-P 的PVDF膜由于有高荧光背景而不适合荧光检测。硝酸纤维素膜荧光背景较弱,有些老师也会用于Western Blotting的荧光检测,但也有老师抱怨检测信号不如使用PVDF膜的化学发光强,较弱的条带不易检测。针对这种情况,低荧光背景的Immobilon-FL 型号PVDF膜被研发出来了。Immobilon-FL 型号由于具有比硝酸纤维素膜更低的自发荧光背景,同时又保留
别的是蛋白上连续的几个氨基酸,也就是线性表位,那么这种抗体可同时用于免疫组化和 Western,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。(限于单抗)W. Western Blot 中抗体的重复应用问题解答:抗体工作溶液一般不主张储存反复使用,但是如抗体比较珍贵,可反复使用2-3次。稀释后应在2-3天内使用,4度保存,避免反复冻融。4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别?解答:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种
实验流程:多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上,随后即可衔接下一轮单标染色,直至全部标记完成,即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合:1)新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2)梯度乙醇浸片,100% 5min;95% 5min;70% 2min。3)灭菌水洗片1min,重复3次。4)10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次。2.微波修复:1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中,用抗原
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