T4 DNA ligase报价

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括T4 DNA ligase报价在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：T4 DNA ligase报价
编号：RFT116
规格：100U
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
T4连接酶
● 产品组成：名称 规格
T4 DNA ligase (5U/μl) 100 U (20μl)
10×T4 DNA Ligation Buffer 0.2 ml
50%PEG Solution 0.15 ml
● 保存：-20℃
● 产品简介：
T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。
活性定义：此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位（cohesive-end ligation unit, CEU）。1个CEU单位定义为在20 μl的连接反应体系中，在16℃30分钟内，能使50%的经HindIII消化的λDNA*(代"片")段连接所需的酶量。
● 注意事项
1．T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2．PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3．为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4．由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
● 使用方法：一 DNA*(代"片")段和载体DNA的连接
1）粘性末端的连接
1．反应体系： 10μl体系 终浓度
线性载体DNA x μl 10-50 ng
插入DNA*(代"片")段 y μl 插入片段：载体=1:1-5:1*
10×ligation buffer 1 μl 1×
T4 DNA ligase(5U/μl) 0.1 μl 0.5 U
ddH2O up to 10 μl
*：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng（0.025pmol），10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。
注：1）若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后进行电击转化。
2）若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
3）在10 μl连接体系中若T4连接酶的终浓度大于1 U，必须对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后方可进行电转。
2）平末端的连接
1．反应体系： 10μl体系 终浓度
线性平末端载体DNA* x μl 10-50 ng
插入DNA*(代"片")段 y μl 插入片段：载体=1:1-5:1**
10×ligation buffer 1 μl 1×
T4 DNA ligase(5U/μl) 0.5 μl 2.5 U
50% PEG solution 1 μl 5%
ddH2O up to 10 μl
*：平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
**：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng（0.025pmol），10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。
注：1）由于平末端连接体系中，T4 ligase用量较大，若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯*(代"仿")抽提对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后才能进行电击转化。
2）若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
二 线性DNA的自身环化
1．反应体系： 50μl体系 终浓度
线性载体DNA x μl 10-50 ng
10×ligation buffer 5 μl 1×
T4 DNA ligase(5U/μl) 1 μl 5 U
ddH2O up to 50 μl
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。
注：1）若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯*(代"仿")抽提对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后才能进行电击转化。
三 接头连接
1．反应体系： 20μl体系 终浓度
线性DNA x μl 100-500 ng
磷酸化接头 y μl 1-2 μg
10×ligation buffer 2 μl 1×
50% PEG solution 2 μl 5%
T4 DNA ligase(5U/μl) 0.4 μl 2 U
ddH2O up to 20 μl
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

我公司的T4 DNA ligase报价，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销售下列产品：

·超低分子量蛋白电泳试剂盒
编号：RFT078
规格：10次
● 产品组成：组分 名称 规格 贮存 运输
组分1 2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 15 ml 4℃ 常温
组分2 2×多肽电泳分离胶缓冲液 30 ml 4℃ 常温
组分3 2×PAA溶液 超低浓缩胶用 15 ml 4℃ 常温
组分4 2×PAA溶液 超低分离胶用 30 ml 4℃ 常温
组分5 10% APS（干粉） 5 ml 常温 常温
组分6 TEMED 0.5 ml 常温 常温
组分7 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS) 500 ml（干粉） 常温 常温
组分8 2×Tricine 上样缓冲液（含还原剂） 1 ml -20℃ 常温
组分9 FastBlue蛋白染色液 500 ml 常温 常温
● 产品简介：
本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳（多肽电泳）全*(代"套")试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶（8×10cm）。具有以下特点：1 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5kD多肽。
3 稳定性高：凝胶缓冲液pH为中性，存放时间长。
4 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。
● 贮存和效期：按照标签温度贮存；开封后有效期一年。
● 使用说明：一. 10% APS配制：10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
二. 制胶：I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
表一 （一块1 mm mini胶用量）*
分离胶 浓缩胶
18％T /5 ml 5％T /2 ml
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 / 1 ml
2×多肽电泳分离胶缓冲液 2.5 ml /
2×PAA溶液 超低浓缩胶用 / 1 ml
2×PAA溶液 超低分离胶用 2.5 ml /
10％APS 45-60 μl** 20-30 μl
TEMED 5 μl 2 μl
注： * 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。
表二 超低凝胶制备凝固时间表
环境温度 20℃
分离胶配制 浓缩胶配制
分离胶配制量 5 ml -
浓缩胶配制量 - 2 ml
10%APS 50 μl 20 μl
TEMED 5 μl 2 μl
凝固时间 5-10 分钟 20-30 分钟
2．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。
3．静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3．静置20-30分钟待凝胶聚合
三. 电泳：10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml 10×TTS缓冲液。
表三 1×TTS缓冲液配制
1×TTS配制量 500 ml 1×TTS配制量 1000 ml
10×TTS 50 ml 100 ml
超纯水 450 ml 900 ml
注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。
将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，稳压电泳（表四），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表四 多肽电泳条件
恒电压 150V
起始电流 60-75mA/板胶
结束电流 15-25mA/板胶
电泳时间 2.5-3小时

四. 染色（使用组分9-FastBlue蛋白染色液）：● 用前必读：1 使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。
● 使用方法：1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。
2. 摇床上常温摇动10-15分钟。
3. 观察结果。
● 注意事项：1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2. 常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
3. 本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
4. 本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。


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·植物基因组提取试剂盒
编号：RFT038
规格：50次
● 储存条件和效期：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNaseA收到后-20℃保存。
● 产品简介：
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种植物细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA*(代"片")段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
● 提取得率：材料 DNA得量（μg/100mg）
Arabidopsis 3–4 μg
Barley 8–12 μg
Maize 15-20
Pine 20-25
Potato 4-6
Rape 2-4
Spinach 5-10
Tobacco 20-25
Wheat 25-30
● 准备工作：1. 准备液氮；65℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2. 按照标签所示在缓冲液AP3和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液AP1，缓冲液AP2和缓冲液AP3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
● 操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1. 取适量植物新鲜组织500mg-1g加入液氮充分研磨，取约100mg粉末置于1.5ml离心管中，加入400 μl 缓冲液AP1和6 μl RNaseA (10mg/ml)，漩涡震荡1分钟。
2. 将离心管放在65℃水浴10分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3. 加入130 μl 缓冲液AP2，颠倒混匀，冰浴5分钟。
4. 12,000rpm离心5分钟。
注：此步骤离心去除去垢剂，蛋白以及多糖等杂质。
5. 取上清（通常为400 μl）转移到过滤柱CF中，12,000rpm 离心1分钟。
6. 将滤出液转移到1.5 ml离心管中，加入1.5倍体积（例如400 μl的上清液加600 μl缓冲液AP3）缓冲液AP3（使用前请注意是否已经加入无水乙醇），立即颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
7．吸取步骤6中的混合液加入到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。
注：离心吸附柱的最大容积是700μl，如果一次不能完全上柱，可以分次上柱离心，保证全部溶液全部加到离心柱中。
8．向吸附柱CG中加入500 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
9．重复步骤8。
10. 可选步骤：如果离心柱的吸附膜上有颜色，向吸附柱CG中加入500 μl无水乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
11．将吸附柱CG放回废液收集管中，12,000 rpm离心2分钟。
注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
12．将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl经65℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm g离心2分钟。
注；1. 洗脱缓冲液体积最好不少于50 μl，体积过小影响回收效率。
2. 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13. DNA产物-20℃保存。
● DNA浓度及纯度检测：基因组DNA*(代"片")段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA*(代"片")段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。


T4 DNA ligase报价关键词：RFT116,T4 DNA ligase,百奥莱博


·BCA蛋白定量试剂盒
编号：RFT057
规格：50次
● 试剂盒内容及保存：产品名称 包装 贮存方式
BCA试剂A 100 ml RT
BCA试剂B 3 ml RT
牛血清白蛋白(BSA)标准溶液（5 mg/ml） 2×1 ml -20℃
PBS溶液 10 ml 4℃
说明书 1份
● 储存条件和效期：试剂A和试剂B室温贮存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存；PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。
● 产品简介：
BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理是蛋白质分子中肽键结构在碱性环境下能与Cu2+生产络合物，并将Cu2+还原成Cu+，而BCA试剂可以特异性地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在562nm处有最大的光吸收值，该复合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可以根据吸收值的大小来测定蛋白的含量。
本试剂盒可以检测500个样品（使用微孔板）或50个样品（使用试管）。
● 产品特点：1. 灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml（在20-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系），最小检测蛋白量达到0.2μg，待测样品体积为1-20μl。
2. BCA法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
● 操作方法
BCA工作液配制：将试剂A和试剂B按照体积比50:1比例混合，配成BCA工作液。
如，取50ml 试剂A与1ml试剂B混合，配成51 ml BCA工作液。
注：BCA工作液室温可放置一周不失效。
微孔板测定程序：（工作范围20-2000 μg/ml）
1. 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取20μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100μl，使其终浓度为1.0 mg/ml。
2. 按照下表配制BSA标准测定溶液：编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
1 mg/ml BSA 标准溶液 μl 5 mg/ml BSA 标准溶液 μl
BSA标准溶液 μl 0 0.5 2.5 5.0 10 15 20 6 8
PBS 溶液 μl 20 19.5 17.5 15 10 5 0 14 12
BSA终浓度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000
总体积 μl 20 μl
3. 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20 μl
4. 向微孔板中加入200 μl BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
注：也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
5. 测定562 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
6. 以A562为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。
试管测定程序：（工作范围20-1000 μg/ml）
1. 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取150μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入600μl PBS溶液稀释至750μl，使其终浓度为1.0 mg/ml。
2. 按照下表配制BSA标准测定溶液：编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
1 mg/ml BSA 标准溶液 μl 5 mg/ml BSA 标准溶液 μl
BSA标准溶液 μl 0 2.5 12.5 25 50 75 100 30 40
PBS 溶液 μl 100 97.5 87.5 75 50 25 0 70 60
BSA终浓度 μg/ml 0 25 125 250 500 750 1000 1500 2000
总体积 μl 100 μl
3. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到100 μl；
4. 向试管中加入2ml BCA工作液，混匀，37℃放置30分钟；
注：也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
5. 测定562 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
6. 以A562为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。

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