北京促销RFT110型pRT20-T载体试剂盒价格

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京促销RFT110型pRT20-T载体试剂盒价格在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京促销RFT110型pRT20-T载体试剂盒价格
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
系统说明
pRT20-T 载体是一种高效克隆PCR产物(TA Clonging)的专用载体。它是由pUC19载体改造成的(pRT20-T载体在pUC19质粒MCS位点附近插入T7启动子序列)，MCS位点经过EcoR V酶切后在两侧的3’端添加”T”制备而成。因大部分Taq酶会在PCR产物的3’末端添加一个“A”，所以用本载体可以高效地进行PCR产物克隆。
本载体在pUC19载体的基础上对LacZ基因的编码序列进行了改造，加强了重组菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB琼脂平板上的颜色筛选，具有更明显的蓝色菌落颜色，大大降低了假阳性率。由于在MCS位点附近插入了T7启动子序列，因此可以对插入DNA*(代"片")段直接进行体外转录实验。
本载体在插入位点两侧各有一个BamH I位点，可以用BamH I直接酶切检测重组子，简化了检测程序。
按照标准连接体系计算（10μl体系用1μl载体），本载体可至少使用20次。
包装内含有了2×ligation solution，是混合有T4 连接酶，连接buffer以及连接增强剂的MasterMix，使用方便，且能显著提高连接效率。
另外，包装内提供M13引物，可以方便用菌落或菌液PCR快速检测阳性克隆。

除北京促销RFT110型pRT20-T载体试剂盒价格外，我公司正在打折促销以下产品：
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F030624 FITC标记兔抗牛IgG抗体 Rabbit Anti-Bovine IgG*FITC
二水还原茚三酮 L-Citrulline 5950-69-6
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5-鸟苷二磷酸二钠盐 Penicillin&Streptomycin solution,γ-Irradiated 7415-69-2
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Rink Amide AM树脂 β-Alanine methyl ester hydrochloride
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·土壤基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT036
规格：50次
● 储存条件和效期：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年。缓冲液R2和R3可能有沉淀产生，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。
● 产品简介：
土壤样品存在大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等，而纯化的DNA 中只要有这些微量物质的存在，都会影响到PCR等酶促反应。本公司的土壤试剂盒采用独特的腐殖酸去除液（缓冲液R2）能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。
● 准备工作：1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
● 标准操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1. 称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780 μl 缓冲液R1与100 μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注意：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2. 加入200 μl 缓冲液R3（R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用），涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注意：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3. 12000 rpm(~13,000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180 μl 缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4. 冰上放置5分钟。12000 rpm(~13,000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5. 加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13,000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6. 加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7. 将上步混合液转移到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8. 向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。
9. 向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13,000g) 离心30秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10. 向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13,000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11. 12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
12. 将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100 μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟。
注； = 1 \* GB3 ① 洗脱缓冲液体积最好不少于50 μl，体积过小影响回收效率。
= 2 \* GB3 ② 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13. DNA产物-20℃保存。
大量操作步骤（针对含微量核酸的样品）
1. 称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2. 加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3.3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。
4. 冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5. 以下按标准操作步骤的第五步继续操作。
● DNA浓度及纯度检测：基因组DNA*(代"片")段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA*(代"片")段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。
● 常见问题分析：常见问题 可能原因 建议
没有洗脱出DNA 加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇 样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。
漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低浓度的DNA量 缓冲液R2使用过量 按照步骤1加入适量缓冲液R2
洗脱体积太小 洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。
洗涤不恰当 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低A260/A280比率 蛋白污染 不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱
洗脱液pH值不合适 确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。
下游应用不好 提取的DNA含盐量高 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。
提取的DNA含有乙醇 步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。
抑制PCR反应 增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCR抑制因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。


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·pUC18/MspI（34-501bp）
编号：RFT025
规格：20次|50次
●产品简介：本产品是由pUC18质粒经MspI完全酶切得到的，包括501，489，404，353，242，190，147，110，89，67，34bp DNA*(代"片")段，适用于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳中DNA条带的分析。
本产品为浓缩型，配有6×DNA loading buffer，使用时按照比例配制即可。
● 储存条件：4℃ 贮存6个月（-20℃贮存一年）。
● 使用方法：1.取2 μl（0.5 μg）DNA加1 μl 6×DNA loading buffer，3 μl去离子水混匀。取2-5μl混匀品加入到琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中（每1mm×1mm加样孔加1μl，如果加样孔宽于5mm，可以适当增加上样量）就行电泳。
注：不建议用于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2.建议电泳条件为2.5-3.0％的琼脂糖凝胶，电压4-10 v/cm，凝胶长度7cm；或5.0-8.0％的聚丙烯酰胺凝胶，电压10 v/cm，凝胶长度15cm。
3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注：a 如果使用Goldview等染料就行染色，由于灵敏度比EB低，请酌情增加Marker的上样量。
b 如果对聚丙烯酰胺凝胶进行银染，由于灵敏度较高，请适当降低Marker的上样量。
● 注意事项：1.凝胶介质的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖和丙稀酰胺。
2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

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