RFT110型pRT20-T载体试剂盒特价优惠

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RFT110型pRT20-T载体试剂盒特价优惠的品牌：百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多pRT20-T载体试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

编号：RFT110
规格：20次
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
系统说明
pRT20-T 载体是一种高效克隆PCR产物(TA Clonging)的专用载体。它是由pUC19载体改造成的(pRT20-T载体在pUC19质粒MCS位点附近插入T7启动子序列)，MCS位点经过EcoR V酶切后在两侧的3’端添加”T”制备而成。因大部分Taq酶会在PCR产物的3’末端添加一个“A”，所以用本载体可以高效地进行PCR产物克隆。
本载体在pUC19载体的基础上对LacZ基因的编码序列进行了改造，加强了重组菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB琼脂平板上的颜色筛选，具有更明显的蓝色菌落颜色，大大降低了假阳性率。由于在MCS位点附近插入了T7启动子序列，因此可以对插入DNA*(代"片")段直接进行体外转录实验。
本载体在插入位点两侧各有一个BamH I位点，可以用BamH I直接酶切检测重组子，简化了检测程序。
按照标准连接体系计算（10μl体系用1μl载体），本载体可至少使用20次。
包装内含有了2×ligation solution，是混合有T4 连接酶，连接buffer以及连接增强剂的MasterMix，使用方便，且能显著提高连接效率。
另外，包装内提供M13引物，可以方便用菌落或菌液PCR快速检测阳性克隆。

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·DNA Marker（100-600bp）
编号：RFT018
规格：100次
● 产品简介：
本产品是由6条带状双链DNA条带组成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品中已含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。6条带的大小和含量分别为100（50ng/5μl），200（50ng/μl），300(50ng/μl)，400（100ng/μl），500（50ng/μl），600(50ng/μl) bp。
● 储存条件：4℃ 贮存（长期贮存置于-20℃）。
● 使用方法：1.取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注：根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm（厚度×宽度）加样孔上样1μl；窄齿梳子（一般为1mm×2mm）上样2μl；宽齿梳子（一般为1mm×5mm）上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2.建议电泳条件：凝胶浓度为2.0-2.5％，凝胶长度5-7cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间20-25分钟。
3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注：如果使用Goldview等染料就行染色，由于灵敏度比EB低，请酌情增加Marker的上样量。
● 注意事项：1.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。
3.该Marker适用于DNA*(代"片")段大小的确定和对DNA含量的精确定量。


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PY02-285 高斯氏合成培养基 250克
ARB10498 人白血病抑制因子(LIF)含量分析 Human leukemia inhibitory factor,lif ELISA KIT
BTN131071 牛血清γ球蛋白标准品 Bovine γ IgG Standard
ARB13594 兔子肝细胞生长因子(HGF)含量分析 Rabbit hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
ARB11449 人铁调素Hepcidin 酶标法分析 Human hepcidin ELISA KIT
BTN120685 先锋霉素溶液 Cephalotin Solution
ARB10615 人血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)Elisa定量检测 Human fibrinoPeptide a,fpa ELISA KIT
ARB10912 人抗凝血素抗体IgM(APT1)elisa检测操作说明书 Human anti-prothrombins antibodiesigm,apt1 ELISA KIT
ARB12557 大鼠脂氧合酶同工酶1(LOX-1)ELISA检测服务 Rat lox-1 ELISA KIT
ARB10343 人牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa检测说明书 Human calf intestinal alkaline phosphatase,ciap ELISA KIT
ARB10101 人E选择素(E-SelectIn/CD62E)检测服务 Human e-selectin ELISA KIT
70458-96-7 Norfloxacin 诺氟沙星
ARB12363 大鼠转化生长因子α(TGF-α)酶标法分析 Rat transforming growth factor α,tgf-α ELISA KIT
ARB11408 人神经激肽B(NKB)含量检测 Human neurokinins b,nkb ELISA KIT
50-02-2 Dexamethasone 地塞米松
BTN81224 BCIP/NBT显色试剂盒 BCIP/NBT Chromogenic Kit
酒石酸泰乐菌素 PEPC 74610-55-2
L-异亮氨酸 Parafuchsin hydrochloride 73-32-5
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·T4 DNA ligase
编号：RFT116
规格：100U
T4连接酶
● 产品组成：名称 规格
T4 DNA ligase (5U/μl) 100 U (20μl)
10×T4 DNA Ligation Buffer 0.2 ml
50%PEG Solution 0.15 ml
● 保存：-20℃
● 产品简介：
T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。
活性定义：此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位（cohesive-end ligation unit, CEU）。1个CEU单位定义为在20 μl的连接反应体系中，在16℃30分钟内，能使50%的经HindIII消化的λDNA*(代"片")段连接所需的酶量。
● 注意事项
1．T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2．PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3．为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4．由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
● 使用方法：一 DNA*(代"片")段和载体DNA的连接
1）粘性末端的连接
1．反应体系： 10μl体系 终浓度
线性载体DNA x μl 10-50 ng
插入DNA*(代"片")段 y μl 插入片段：载体=1:1-5:1*
10×ligation buffer 1 μl 1×
T4 DNA ligase(5U/μl) 0.1 μl 0.5 U
ddH2O up to 10 μl
*：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng（0.025pmol），10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。
注：1）若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后进行电击转化。
2）若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
3）在10 μl连接体系中若T4连接酶的终浓度大于1 U，必须对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后方可进行电转。
2）平末端的连接
1．反应体系： 10μl体系 终浓度
线性平末端载体DNA* x μl 10-50 ng
插入DNA*(代"片")段 y μl 插入片段：载体=1:1-5:1**
10×ligation buffer 1 μl 1×
T4 DNA ligase(5U/μl) 0.5 μl 2.5 U
50% PEG solution 1 μl 5%
ddH2O up to 10 μl
*：平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
**：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng（0.025pmol），10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。
注：1）由于平末端连接体系中，T4 ligase用量较大，若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯*(代"仿")抽提对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后才能进行电击转化。
2）若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
二 线性DNA的自身环化
1．反应体系： 50μl体系 终浓度
线性载体DNA x μl 10-50 ng
10×ligation buffer 5 μl 1×
T4 DNA ligase(5U/μl) 1 μl 5 U
ddH2O up to 50 μl
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。
注：1）若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或氯*(代"仿")抽提对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后才能进行电击转化。
三 接头连接
1．反应体系： 20μl体系 终浓度
线性DNA x μl 100-500 ng
磷酸化接头 y μl 1-2 μg
10×ligation buffer 2 μl 1×
50% PEG solution 2 μl 5%
T4 DNA ligase(5U/μl) 0.4 μl 2 U
ddH2O up to 20 μl
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3．反应条件：16℃孵育30分钟。
4．65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

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