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RFT110型pRT20-T载
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259
北京百奥莱博科技有限公司
20次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
RFT110型pRT20-T载体试剂盒特价优惠的品牌:百奥莱博,是优质的克隆与表达产品,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多pRT20-T载体试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
编号:RFT110规格:20次产地:国产|进口品牌:百奥莱博系统说明pRT20-T 载体是一种高效克隆PCR产物(TA Clonging)的专用载体。它是由pUC19载体改造成的(pRT20-T载体在pUC19质粒MCS位点附近插入T7启动子序列),MCS位点经过EcoR V酶切后在两侧的3’端添加”T”制备而成。因大部分Taq酶会在PCR产物的3’末端添加一个“A”,所以用本载体可以高效地进行PCR产物克隆。本载体在pUC19载体的基础上对LacZ基因的编码序列进行了改造,加强了重组菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB琼脂平板上的颜色筛选,具有更明显的蓝色菌落颜色,大大降低了假阳性率。由于在MCS位点附近插入了T7启动子序列,因此可以对插入DNA*(代"片")段直接进行体外转录实验。本载体在插入位点两侧各有一个BamH I位点,可以用BamH I直接酶切检测重组子,简化了检测程序。按照标准连接体系计算(10μl体系用1μl载体),本载体可至少使用20次。包装内含有了2×ligation solution,是混合有T4 连接酶,连接buffer以及连接增强剂的MasterMix,使用方便,且能显著提高连接效率。另外,包装内提供M13引物,可以方便用菌落或菌液PCR快速检测阳性克隆。欲咨询购买RFT110型pRT20-T载体试剂盒特价优惠,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:·DNA Marker(100-600bp)编号:RFT018规格:100次● 产品简介:本产品是由6条带状双链DNA条带组成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品中已含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。6条带的大小和含量分别为100(50ng/5μl),200(50ng/μl),300(50ng/μl),400(100ng/μl),500(50ng/μl),600(50ng/μl) bp。● 储存条件:4℃ 贮存(长期贮存置于-20℃)。● 使用方法:1.取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。注:根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl;窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl;宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子,可以适当调整上样量。2.建议电泳条件:凝胶浓度为2.0-2.5%,凝胶长度5-7cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间20-25分钟。3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。注:如果使用Goldview等染料就行染色,由于灵敏度比EB低,请酌情增加Marker的上样量。● 注意事项:1.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。3.该Marker适用于DNA*(代"片")段大小的确定和对DNA含量的精确定量。RFT110型pRT20-T载体试剂盒特价优惠关键词:pRT20-T载体试剂盒,RFT110,百奥莱博PY02-285 高斯氏合成培养基 250克 ARB10498 人白血病抑制因子(LIF)含量分析 Human leukemia inhibitory factor,lif ELISA KITBTN131071 牛血清γ球蛋白标准品 Bovine γ IgG StandardARB13594 兔子肝细胞生长因子(HGF)含量分析 Rabbit hepatocyte growth factor,hgf ELISA KITARB11449 人铁调素Hepcidin 酶标法分析 Human hepcidin ELISA KITBTN120685 先锋霉素溶液 Cephalotin SolutionARB10615 人血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)Elisa定量检测 Human fibrinoPeptide a,fpa ELISA KITARB10912 人抗凝血素抗体IgM(APT1)elisa检测操作说明书 Human anti-prothrombins antibodiesigm,apt1 ELISA KITARB12557 大鼠脂氧合酶同工酶1(LOX-1)ELISA检测服务 Rat lox-1 ELISA KITARB10343 人牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa检测说明书 Human calf intestinal alkaline phosphatase,ciap ELISA KITARB10101 人E选择素(E-SelectIn/CD62E)检测服务 Human e-selectin ELISA KIT70458-96-7 Norfloxacin 诺氟沙星ARB12363 大鼠转化生长因子α(TGF-α)酶标法分析 Rat transforming growth factor α,tgf-α ELISA KITARB11408 人神经激肽B(NKB)含量检测 Human neurokinins b,nkb ELISA KIT50-02-2 Dexamethasone 地塞米松BTN81224 BCIP/NBT显色试剂盒 BCIP/NBT Chromogenic Kit酒石酸泰乐菌素 PEPC 74610-55-2L-异亮氨酸 Parafuchsin hydrochloride 73-32-5RFT110型pRT20-T载体试剂盒特价优惠关键词:pRT20-T载体试剂盒,RFT110,百奥莱博·T4 DNA ligase编号:RFT116规格:100UT4连接酶● 产品组成:名称 规格T4 DNA ligase (5U/μl) 100 U (20μl)10×T4 DNA Ligation Buffer 0.2 ml50%PEG Solution 0.15 ml● 保存:-20℃● 产品简介:T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。活性定义:此酶的活力单位为Weiss Unit。1个Weiss Unit相当于约200个粘性末端连接单位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1个CEU单位定义为在20 μl的连接反应体系中,在16℃30分钟内,能使50%的经HindIII消化的λDNA*(代"片")段连接所需的酶量。● 注意事项1.T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。2.PEG可以极大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。3.为了提高转化效率,转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。4.由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。● 使用方法:一 DNA*(代"片")段和载体DNA的连接1)粘性末端的连接1.反应体系: 10μl体系 终浓度线性载体DNA x μl 10-50 ng插入DNA*(代"片")段 y μl 插入片段:载体=1:1-5:1*10×ligation buffer 1 μl 1×T4 DNA ligase(5U/μl) 0.1 μl 0.5 UddH2O up to 10 μl*:载体与插入片段的摩尔数比需要优化:一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数:pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如:插入片段2000bp,线性载体为3000bp,如果载体使用量为50ng(0.025pmol),10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3,则需要2000bp pmol数为0.075pmol,插入片段2000bp的使用量为100ng。2.彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。3.反应条件:16℃孵育30分钟。4.可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。注:1)若要提高电转实验效率,推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后,用DNA产物纯化试剂盒对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后进行电击转化。2)若要提高转化子数目,可将连接时间延长至1小时。3)在10 μl连接体系中若T4连接酶的终浓度大于1 U,必须对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后方可进行电转。2)平末端的连接1.反应体系: 10μl体系 终浓度线性平末端载体DNA* x μl 10-50 ng插入DNA*(代"片")段 y μl 插入片段:载体=1:1-5:1**10×ligation buffer 1 μl 1×T4 DNA ligase(5U/μl) 0.5 μl 2.5 U50% PEG solution 1 μl 5%ddH2O up to 10 μl*:平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时,应首先将载体进行去磷酸化处理,以防止其自身环化。**:载体与插入片段的摩尔数比需要优化:一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数:pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如:插入片段2000bp,线性载体为3000bp,如果载体使用量为50ng(0.025pmol),10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3,则需要2000bp pmol数为0.075pmol,插入片段2000bp的使用量为100ng。2.彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。3.反应条件:16℃孵育30分钟。4.可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。注:1)由于平末端连接体系中,T4 ligase用量较大,若要提高电转实验效率,推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后,用DNA产物纯化试剂盒或氯*(代"仿")抽提对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后才能进行电击转化。2)若要提高转化子数目,可将连接时间延长至1小时。二 线性DNA的自身环化1.反应体系: 50μl体系 终浓度线性载体DNA x μl 10-50 ng10×ligation buffer 5 μl 1×T4 DNA ligase(5U/μl) 1 μl 5 UddH2O up to 50 μl2.彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。3.反应条件:16℃孵育30分钟。4.可取5 μl连接产物热击转化50 μl感受态细胞或取1-2 μl连接产物电击转化50 μl感受态细胞。注:1)若要提高电转实验效率,推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后,用DNA产物纯化试剂盒或氯*(代"仿")抽提对连接后的DNA*(代"片")段进行纯化后才能进行电击转化。三 接头连接1.反应体系: 20μl体系 终浓度线性DNA x μl 100-500 ng磷酸化接头 y μl 1-2 μg10×ligation buffer 2 μl 1×50% PEG solution 2 μl 5%T4 DNA ligase(5U/μl) 0.4 μl 2 UddH2O up to 20 μl2.彻底轻柔混匀后,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。3.反应条件:16℃孵育30分钟。4.65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。
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