JM110化学感受态细胞促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售JM110化学感受态细胞促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：JM110化学感受态细胞促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：20×100ul
编号：RFT114
储存条件：-70℃冻存六个月
产品简介：本公司生产的JM1110感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
JM110菌株介绍：基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]
特点：1.JM 110 是一种甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，使DNA 不被甲基化，使用其转化所得到的质粒DNA，可被对dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
2.只适用于转化质粒DNA。
3.细胞具有硫酸链霉素(Strr) 抗性。
操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA（50 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟（150转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12—16小时。
注：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200—300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）
注意事项：1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

我公司的JM110化学感受态细胞促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销售下列产品：

·兔抗GAPDH多克隆IgG抗体
编号：RFT121
规格：0.1ml
背景：甘油醛-3-磷酸脱氢酶 （ Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解glycolysis）过程中的关键酶，分子量为 37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反应。GAPDH 作为看家基因在同种细胞或者组织中一般是恒定、高水平表达的，常用作 Western Blot实验的内参照。来源兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体源自重组人GAPDH 蛋白 C 端片段免疫新西兰大白兔。
特异性：兔抗GAPDH多克隆IgG抗体推荐用于人、 大鼠、小鼠及其它哺乳动物 GAPDH 蛋白检测，特异性极佳。
纯化：分离抗血清并亲和层析纯化。
应用
免疫组化 1:100～400
免疫荧光 1:100～400
Western Blot 1:500～1000
ELISA 1:2000～8000
最优稀释比例依不同实验具体情况而定。
保存：兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体含 50％甘油，-20℃保存，避免温度剧烈变化。
说明：兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体仅供研究使用，禁止用于诊断及体内实验。

·超低分子量蛋白Marker(3.3-45kD)
编号：RFT047
规格：10次
● 储存条件： -20℃保存，开封后有效期12个月。
● 产品简介：
本产品包含2种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-45kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
● 使用说明：第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品每次使用前，要95℃加热处理5分钟。
一. 制胶：I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置5-10分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置20-30分钟装待凝胶聚合
二. 电泳：1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，95℃加热处理5分钟，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液（Cat No：CB010）用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（样品已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
三. 染色
根据常规实验步骤，用配方5和6（表三）进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。


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·土壤基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT036
规格：50次
● 储存条件和效期：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年。缓冲液R2和R3可能有沉淀产生，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。
● 产品简介：
土壤样品存在大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等，而纯化的DNA 中只要有这些微量物质的存在，都会影响到PCR等酶促反应。本公司的土壤试剂盒采用独特的腐殖酸去除液（缓冲液R2）能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。
● 准备工作：1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
● 标准操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1. 称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780 μl 缓冲液R1与100 μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注意：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2. 加入200 μl 缓冲液R3（R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用），涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注意：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3. 12000 rpm(~13,000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180 μl 缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4. 冰上放置5分钟。12000 rpm(~13,000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5. 加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13,000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6. 加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7. 将上步混合液转移到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8. 向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。
9. 向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13,000g) 离心30秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10. 向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13,000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11. 12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
12. 将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100 μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13,000g)离心2分钟。
注； = 1 \* GB3 ① 洗脱缓冲液体积最好不少于50 μl，体积过小影响回收效率。
= 2 \* GB3 ② 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13. DNA产物-20℃保存。
大量操作步骤（针对含微量核酸的样品）
1. 称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2. 加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3.3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。
4. 冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5. 以下按标准操作步骤的第五步继续操作。
● DNA浓度及纯度检测：基因组DNA*(代"片")段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA*(代"片")段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。
● 常见问题分析：常见问题 可能原因 建议
没有洗脱出DNA 加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇 样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。
漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低浓度的DNA量 缓冲液R2使用过量 按照步骤1加入适量缓冲液R2
洗脱体积太小 洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。
洗涤不恰当 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低A260/A280比率 蛋白污染 不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱
洗脱液pH值不合适 确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。
下游应用不好 提取的DNA含盐量高 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。
提取的DNA含有乙醇 步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。
抑制PCR反应 增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCR抑制因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。


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·40％丙稀酰胺溶液(29:1)
编号：RFT068
英文名称：40%PAA(29:1)，40％ Acylamide Solution(29:1)
规格：100ml
● 产品包装：产品名称 产品包装 说明书
40%丙稀酰胺(37.5:1) 100ml 1份
● 产品简介：
40%丙稀酰胺(29:1)即为含40% acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的质量比例为29:1。常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)，包括SDS-PAGE胶等，可以用于蛋白的分离。
● 保存条件： 4℃避光保存。
● 注意事项： 丙稀酰胺溶液有一定毒性，使用时请注意适当防护。

·300bp DNA ladder（300-5000bp）
编号：RFT007
英文名称：40%PAA(29:1)，40％ Acylamide Solution(29:1)
规格：100次
● 产品简介：
本产品是由9条带状双链DNA组成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。本产品为即用型产品，已含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。 本产品中9条带为300，600，900，1200，1500，1800，2500，3000，5000bp，其中1500bp条带为100ng/5μl，其余条带浓度为50ng/5μl。
● 储存条件： 开封后4℃ 贮存6个月，-20℃贮存 1年。
● 使用方法：1.取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中（每1mm×1mm加样孔加1μl，如果加样孔宽于5mm，可以适当增加上样量）就行电泳。
2.建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度8-10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间30-35分钟。
3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注：如果使用Goldview等染料就行染色，由于灵敏度比EB低，请酌情增加Marker的上样量。
● 注意事项：1.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果

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