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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
363
- 英文名:
TOP10 Chemically Competent Cell
- 保质期:
一周
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-80℃
- 规格:
100μl×10管
特别提示:包括TOP10化学感受态细胞在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:TOP10化学感受态细胞
英文名称:TOP10 Chemically Competent Cell
产品货号:SY0011
产品规格:100μl×10管
本品是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测,转化效率可达108 cfu/μg,广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
TOP10感受态细胞基因型:F-mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Strr) endA1 nupG
储存条件:-80℃
组份:
TOP10感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl
注意事项
1)感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2)整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3)为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。
4)为防止转化不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,最低化实验可能遇到的风险。
使用方法
1)取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用,应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2)向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30min。
3)将离心管置于42℃水浴中放置60-90 s,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3min,该过程不要摇动离心管。
4)向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min(150 rpm), 目的是促使菌体复苏,抗性基因表达。
5)将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,37℃培养12-16 h。
【注】:涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存,一周之内可重新涂板。
我公司销售的TOP10化学感受态细胞报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选,宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉(lacZΔΜ15)。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白,可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株,如BL21(DE3)。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时(>7-8 kb),经转化
法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞:处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子):带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞,用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态,然后与 pUC18质粒共保温,实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因,因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性,用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释,在含氨
4℃,14000r/m离心10min。 7.12 弃上清,空气中干燥。 7.13 10μl H2O悬浮细胞。8、转化(要求:4℃预冷) 8.1 冰上融化感受态细胞(感受态细胞的制备见分子克隆啦)Top10f’。 8.2 加100μl转化细胞到预冷的1.5ml离心管中,枪头轻轻吹打混匀。 8.3 冰上孵育30min。 8.4 42℃,45S~50S。 8.5 冰上孵育2min后,加1ml LB。 8.6 37℃,1h,250r/m. 8.7 2500r/m
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