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- 泽叶生物
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- ZY-PCR-27
- 2025年07月08日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
4℃四个周；如长期保存，2X Direct PCR Mix 须-20℃；勿反复冻融超过3次。
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
50T/100T
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
2）大肠埃希菌(大肠O157)stx1(282bp)和stx2(584bp)常规PCR检测试剂盒普通PCR反应流程
3）反应原理
4）PCR循环
5）与荧光定量PCR技术相比较主要缺点。
大肠埃希菌(大肠O157)stx1(282bp)和stx2(584bp)常规PCR检测试剂盒荧光PCR简述
定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化，通过仪器软件实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。
荧光PCR检测分为两种方法：荧光探针法和荧光染料法。
荧光探针法检测原理：
荧光PCR如何实现实时监控的呢？
Ø PCR反应体系中加入荧光染料
Ø 所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分（检测器、激发光源、热循环模块）
Ø 在扩增过程中，荧光信号随着PCR产物的增加而增强
Ø 每个循环结束后，定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加
Ø PCR软件计算出数据，用于实验结果的分析
ARMS检测方法；1个SNP位点设计双管反应，含目的基因检测及内参检测双通道。
大肠埃希菌(大肠O157)stx1(282bp)和stx2(584bp)常规PCR检测试剂盒技术特点：
Ø 准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。
Ø 高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。
Ø 快速：整个检测流程只需3小时。
Ø 简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。
Ø 防污染
Ø 高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。
沙门氏菌PCR检测试剂盒 50T
沙门氏菌和痢疾杆菌PCR联合测定试剂盒 50T
沙门氏菌属PCR检测试剂盒 50T
沙眼衣原体PCR检测试剂盒 50T
沙眼衣原体和淋球菌PCR联合测定试剂盒 50T
山羊痘病毒PCR检测试剂盒 50T
山羊关节炎脑炎病毒PCR检测试剂盒 50T
伤寒杆菌PCR检测试剂盒 50T
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文献和实验，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
的10min离心最烦恼的。现在maxgen试剂盒开发的质粒提取试剂盒只需要离心1min，能够节省这一部分的时间。 6 之后的上样于硅胶柱的时候，直接打开EP管，将上清倒入硅胶柱即可，节省枪头以及时间。调整转速为10000转1min即可，最后一次洗脱乙醇的时候14000rpm 3min即可，不需要之后对硅胶柱进行烘干或者用风筒吹，效果一样非常棒。 7 若想提高质粒的溶解效果，可以使用65度的dd水来溶解，建议都用水，不要用它给的solution来溶解，因为其中有盐，有的时候会对下游实验造成一定
以下是我构建载体的思路，但自己心里没底，不知是否可行，请各位老师指教! 目 的：构建hPOT1正反义基因真核表达载体 材料 DH5α大肠杆菌由学校细胞生物教研室提供；含全长hPOT1 cDNA的pLPCNMyc POT1质粒由美国Rockefeller大学的de Lange教授惠赠；pcDNA-3.1(－)真核表达载体购自美国Invitrogen公司；限制性内切酶BamHⅠ、Xho Ⅰ、Nhe I、T4DNA连接酶和牛小肠碱性磷酸酶（CIP）购自美国Promag公司；超纯质粒提取试剂盒
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