- ¥490
- 泽叶生物
- 中国/美国
- ZY131126-20
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
One-Stop Blunt-ended Cloning Kit
- 库存：
60
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
20 次
基因片段用 Pfu 等 DNA 聚合酶扩增得到的产物为平末端，直接克隆比较困难。做 T/A 克隆时，需要在其末端添加单个碱基 A。本试剂盒提供了在平端添加单个 A 所需 的所有试剂，大大方便后续的 T/A 克隆及序列分析
它具有下列特点：
1. 适用范围包括：由高保真 DNA 聚合酶如 Pfu、Pwo 、DeepVent 等扩增而来的 PCR 产物；一些限制性内切酶如 EcoRV 、SmaI 等酶切产生的 DNA 片段； 粘 端 DNA 用 DNA 聚合酶补平后的片段。 2. 可以在任何平末端 DNA 片段两端分别补上单个脱氧腺嘌呤 A，间接将 PCR 产物 克隆到 T 载体上。
3． 操作快速，5 分钟就可以完成 。
一站式平末端克隆试剂盒使用及效果
将 100 ng DNA ，加入 5µl 10 × Cloning Buffer， 加入无菌水使反应的总体 积为 50 µl，混匀。 72℃保温，5 分钟。产物回收或者 -20℃保存备用。
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文献和实验1、分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1－10μg质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。2、苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。3、分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml。假设1 bp相当于660Da，计算DNA的终浓度（pmol/ml）。4、将载体DNA去磷酸化。5、按下表将适量的DNA转移至无菌的0.5ml离心管：管号DNAA和E载体1 [60fmol (~100ng)]B外源插入
在质粒载体中进行平末端片段的克隆 1． 分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化 1~10 μ g 质粒 DNA 和外源 DNA 片段，使它们能产生平末端。 2． 苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源 DNA 片段。 3． 分别用 TE （ pH 8.0 ）重新溶解纯化出的两种 DNA 沉淀，使终浓度为 100 ng/ml 。 假设 1 bp 相当于 660 Da ，计算 DNA 的终浓度（ pmol/ml
1．分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1~10μg质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。2．苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。3．分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml。 假设1 bp相当于660 Da，计算DNA的终浓度（pmol/ml）。4．将载体DNA去磷酸化。5．按下表将适量的DNA转移至无菌的0.5 ml离心管： 管号DNAA和E载体
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